Adam12 和 lnc015192能夠競爭性吸附miR-34a調節(jié)乳腺癌的發(fā)展

lncRNAs在多種癌癥的發(fā)展中具有重要的作用。但是，lncRNAs在乳腺癌中的功能還不是很清楚。Xiaoming Xie等帶領其團隊探究了在敲除miR-34a和WT小鼠乳腺癌組織中mRNAs和lncRNAs的差異表達情況，并于2018.08.17發(fā)表在Oncogene雜志（IF=7.5）中。在本文中，作者做了一系列的實驗去探究mRNAs和lncRNA在乳腺癌中的功能。結果發(fā)現(xiàn)，在敲除miR-34a小鼠的乳腺癌組織中，Adam12 和 lnc015192顯著上調。下調Adam12 和 lnc015192能夠抑制乳腺癌細胞的遷移、侵襲和EMT。并且進一步實驗也揭示了Adam12 和 lnc015192能夠作為內源競爭性RNA（ceRNA）競爭性調節(jié)miR-34a?？傊?，研究證明Adam12 和 lnc015192能夠通過競爭性吸附miR-34a促進乳腺癌遷移。

技術路線

結果
1.敲除miR-34a小鼠的mRNA表達譜

2.下調Adam12能夠抑制乳腺癌細胞的侵襲和遷移

圖1

a. 在敲除miR-34a和WT小鼠小鼠中，聚類圖分析展示了上調和下調的20和mRNA的表達情況。 b. GO分析差異mRNA的功能。 c. KEGG pathway分析差異mRNA的信號通路。d. Reactome pathway分析差異mRNA。e. qPCR檢測Adam12在敲除miR-34a和WT小鼠中乳腺癌細胞中的表達。f. qPCR檢測Adam12在乳腺癌細胞系中的表達。g. WB檢測Adam12在乳腺癌細胞系中的表達。h. qPCR檢測下調Adam12的效率。i. WB檢測下調Adam12的效率。j. 侵襲實驗。k. WB檢測MET相關marker。l. qPCR檢測MET相關marker。m.來自肺轉移結節(jié)的熒光信號。n. 肺轉移結節(jié)和HE染色。

3. Adam12是miR-34a的靶基因

圖2

a. 預測Adam12和miR-34a的結合位點。b. qPCR檢測miR-34a在12組乳腺癌細胞系中的表達。c. 熒光素酶報告實驗。d. qPCR檢測轉染miR-34a后，Adam12的表達情況。e. WB檢測轉染miR-34a后，Adam12的表達情況。f. 侵襲實驗。g. WB檢測MET相關marker。h. qPCR檢測MET相關marker。i. 來自肺轉移結節(jié)的熒光信號。j. 肺轉移結節(jié)和HE染色。

4. 敲除miR-34a的lncRNA表達譜

5. 下調lnc015192能夠抑制乳腺癌細胞的侵襲和遷移

圖3

a. 在敲除miR-34a和WT小鼠小鼠中，聚類圖分析展示了上調和下調的20和mRNA的表達情況。 b. qPCR檢測lnc015192在敲除miR-34a和WT小鼠中乳腺癌細胞中的表達。c. 使用CPC和CPAT程序對lnc015192進行分析，預測lnc015192是一個non-coding RNA。 d. qPCR檢測lnc015192抑制劑對lnc015192的抑制情況。 e. 侵襲實驗。f. WB檢測MET相關marker。g. qPCR檢測MET相關marker。h. 來自肺轉移結節(jié)的熒光信號。i. 肺轉移結節(jié)和HE染色。

6. lnc015192是miR-34a的靶基因

圖4

a. 預測lnc015192與miR-34a的結合位點。b. qPCR檢測lnc015192的表達水平。 c. 熒光素酶報告實驗。d. qPCR檢測轉染miR-34a后，lnc015192的表達情況。e. WB檢測轉染miR-34a后，lnc015192的表達情況。f. 侵襲實驗。g. WB檢測MET相關marker。h. qPCR檢測MET相關marker。i. 來自肺轉移結節(jié)的熒光信號。j. 肺轉移結

節(jié)和HE染色。

7. lnc015192 和Adam12通過調節(jié)miR-34a互為ceRNA

圖5

a. 在細胞中，RIP實驗驗證miR-34a和lnc015192結合。b. RIP實驗展示lnc015192，Adam12和miR-34a在Ago2上的富集情況。c. 轉染sh-015192后進行RIP實驗。d. 轉染sh-Adam12后進行RIP實驗。e. 轉染sh-015192后的miR-34a的表達水平。f. qPCR檢測轉染sh-015192和miR-34a后，Adam12的表達水平。h. WB檢測轉染sh-015192和miR-34a后，Adam12的表達水平。i. qPCR檢測轉染sh-Adam12和miR-34a后，Adam12的表達水平。