Adam12 和 lnc015192能夠競爭性吸附miR-34a調(diào)節(jié)乳腺癌的發(fā)展

lncRNAs在多種癌癥的發(fā)展中具有重要的作用。但是，lncRNAs在乳腺癌中的功能還不是很清楚。Xiaoming Xie等帶領(lǐng)其團(tuán)隊(duì)探究了在敲除miR-34a和WT小鼠乳腺癌組織中mRNAs和lncRNAs的差異表達(dá)情況，并于2018.08.17發(fā)表在Oncogene雜志（IF=7.5）中。在本文中，作者做了一系列的實(shí)驗(yàn)去探究mRNAs和lncRNA在乳腺癌中的功能。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在敲除miR-34a小鼠的乳腺癌組織中，Adam12 和 lnc015192顯著上調(diào)。下調(diào)Adam12 和 lnc015192能夠抑制乳腺癌細(xì)胞的遷移、侵襲和EMT。并且進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)也揭示了Adam12 和 lnc015192能夠作為內(nèi)源競爭性RNA（ceRNA）競爭性調(diào)節(jié)miR-34a。總之，研究證明Adam12 和 lnc015192能夠通過競爭性吸附miR-34a促進(jìn)乳腺癌遷移。

技術(shù)路線

結(jié)果
1.敲除miR-34a小鼠的mRNA表達(dá)譜

2.下調(diào)Adam12能夠抑制乳腺癌細(xì)胞的侵襲和遷移

圖1

a. 在敲除miR-34a和WT小鼠小鼠中，聚類圖分析展示了上調(diào)和下調(diào)的20和mRNA的表達(dá)情況。 b. GO分析差異mRNA的功能。 c. KEGG pathway分析差異mRNA的信號通路。d. Reactome pathway分析差異mRNA。e. qPCR檢測Adam12在敲除miR-34a和WT小鼠中乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)。f. qPCR檢測Adam12在乳腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)。g. WB檢測Adam12在乳腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)。h. qPCR檢測下調(diào)Adam12的效率。i. WB檢測下調(diào)Adam12的效率。j. 侵襲實(shí)驗(yàn)。k. WB檢測MET相關(guān)marker。l. qPCR檢測MET相關(guān)marker。m.來自肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)的熒光信號。n. 肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)和HE染色。

3. Adam12是miR-34a的靶基因

圖2

a. 預(yù)測Adam12和miR-34a的結(jié)合位點(diǎn)。b. qPCR檢測miR-34a在12組乳腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)。c. 熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)。d. qPCR檢測轉(zhuǎn)染miR-34a后，Adam12的表達(dá)情況。e. WB檢測轉(zhuǎn)染miR-34a后，Adam12的表達(dá)情況。f. 侵襲實(shí)驗(yàn)。g. WB檢測MET相關(guān)marker。h. qPCR檢測MET相關(guān)marker。i. 來自肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)的熒光信號。j. 肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)和HE染色。

4. 敲除miR-34a的lncRNA表達(dá)譜

5. 下調(diào)lnc015192能夠抑制乳腺癌細(xì)胞的侵襲和遷移

圖3

a. 在敲除miR-34a和WT小鼠小鼠中，聚類圖分析展示了上調(diào)和下調(diào)的20和mRNA的表達(dá)情況。 b. qPCR檢測lnc015192在敲除miR-34a和WT小鼠中乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)。c. 使用CPC和CPAT程序?qū)nc015192進(jìn)行分析，預(yù)測lnc015192是一個(gè)non-coding RNA。 d. qPCR檢測lnc015192抑制劑對lnc015192的抑制情況。 e. 侵襲實(shí)驗(yàn)。f. WB檢測MET相關(guān)marker。g. qPCR檢測MET相關(guān)marker。h. 來自肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)的熒光信號。i. 肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)和HE染色。

6. lnc015192是miR-34a的靶基因

圖4

a. 預(yù)測lnc015192與miR-34a的結(jié)合位點(diǎn)。b. qPCR檢測lnc015192的表達(dá)水平。 c. 熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)。d. qPCR檢測轉(zhuǎn)染miR-34a后，lnc015192的表達(dá)情況。e. WB檢測轉(zhuǎn)染miR-34a后，lnc015192的表達(dá)情況。f. 侵襲實(shí)驗(yàn)。g. WB檢測MET相關(guān)marker。h. qPCR檢測MET相關(guān)marker。i. 來自肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)的熒光信號。j. 肺轉(zhuǎn)移結(jié)

節(jié)和HE染色。

7. lnc015192 和Adam12通過調(diào)節(jié)miR-34a互為ceRNA

圖5

a. 在細(xì)胞中，RIP實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-34a和lnc015192結(jié)合。b. RIP實(shí)驗(yàn)展示lnc015192，Adam12和miR-34a在Ago2上的富集情況。c. 轉(zhuǎn)染sh-015192后進(jìn)行RIP實(shí)驗(yàn)。d. 轉(zhuǎn)染sh-Adam12后進(jìn)行RIP實(shí)驗(yàn)。e. 轉(zhuǎn)染sh-015192后的miR-34a的表達(dá)水平。f. qPCR檢測轉(zhuǎn)染sh-015192和miR-34a后，Adam12的表達(dá)水平。h. WB檢測轉(zhuǎn)染sh-015192和miR-34a后，Adam12的表達(dá)水平。i. qPCR檢測轉(zhuǎn)染sh-Adam12和miR-34a后，Adam12的表達(dá)水平。