一樣的研究，不一樣的高分！??！

研究背景:
    1. LncRNA參與了各種生理和病理過(guò)程，在也腫瘤進(jìn)展中起關(guān)鍵作用，并在各種癌癥中異常表達(dá)。
    2. LncRNA可能起競(jìng)爭(zhēng)內(nèi)源性RNA(ceRNA)的作用，從而調(diào)節(jié)miRNA的生物學(xué)功能或表達(dá)。
    3. 具有M2表型的腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAM)是腫瘤微環(huán)境中最豐富的免疫相關(guān)細(xì)胞，并通過(guò)介導(dǎo)血管生成、轉(zhuǎn)移和免疫參與腫瘤發(fā)展。
    4. 缺氧是腫瘤微環(huán)境(TME)的主要特征，它與許多實(shí)體瘤的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移有關(guān)。
    5. HIF-1α是一個(gè)廣泛研究的缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)，它通過(guò)下游靶基因的反式激活介導(dǎo)細(xì)胞對(duì)缺氧的反應(yīng)。 在常氧條件下，HIF-1α受到蛋白酶體降解，而低氧條件則保護(hù)HIF-1α不被降解，從而使HIF-1α易位到細(xì)胞核中以啟動(dòng)基因表達(dá)。

    該研究基于公共數(shù)據(jù)庫(kù)并結(jié)合生物信息學(xué)分析，檢測(cè)了lncRNA BCRT1在乳腺癌組織中的過(guò)表達(dá)，并在一組乳腺癌組織中進(jìn)行了進(jìn)一步的驗(yàn)證。通過(guò)體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)確定了lncRNA BCRT1對(duì)增殖，遷移，侵襲和巨噬細(xì)胞極化的影響。進(jìn)行了熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定和RNA免疫沉淀(RIP)，以揭示lncRNA BCRT1，miR-1303和PTBP3之間的相互作用。染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP)和RT-PCR用于評(píng)估缺氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)對(duì)lncRNA BCRT1的調(diào)節(jié)作用。最終，揭示了一種新的HIF-1α/ lncRNA BCRT1 / miR-1303 / PTBP3通路，可促進(jìn)乳腺癌的進(jìn)展，并提示lncRNA BCRT1可能是乳腺癌的潛在生物標(biāo)志物和治療靶標(biāo)。
    M1檢測(cè)marker(CD80，MCP-1，iNOS和IL-6)
    M2檢測(cè)marker(CD206和MRC-2)
    外泌體檢測(cè)marker(CD63，HSP70和HSP90)
    上皮檢測(cè)biomarker(E-cadherin)
    間充質(zhì)檢測(cè)biomarker(Fibronectin，N-cadherin和Vimentin)
技術(shù)路線:
    1.通過(guò)比對(duì)數(shù)據(jù)庫(kù)中的測(cè)序結(jié)果發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)LncRNA BCRT1
    2.組織和細(xì)胞系對(duì)LncRNA BCRT1的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)
    3.對(duì)LncRNA BCRT1在乳腺癌中的功能和機(jī)制進(jìn)行研究
    4.通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)現(xiàn)LncRNA BCRT1的潛在靶點(diǎn)miR-1303
    5.熒光素酶實(shí)驗(yàn)對(duì)LncRNA BCRT1和miR-1303結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行驗(yàn)證
    6.miR-1303的功能驗(yàn)證，及LncRNA BCRT1和miR-1303見(jiàn)的機(jī)制研究
    7.通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)現(xiàn)miR-1303的潛在靶點(diǎn)PTBP3
    8.熒光素酶實(shí)驗(yàn)對(duì)miR-1303和PTBP3結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行驗(yàn)證
    9.數(shù)據(jù)庫(kù)分析PTBP3表達(dá)量
    10.PTBP3的機(jī)制和功能的檢測(cè)
    11.lncRNA BCRT1是否經(jīng)過(guò)外泌體促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移
    12.外泌體lncRNA BCRT1對(duì)巨噬細(xì)胞極化的影響
    13.LncRNA BCRT1和缺氧的關(guān)系驗(yàn)證
    14.LncRNA BCRT1的靶基因PTBP3與缺氧誘導(dǎo)因子HIF-1α的關(guān)系 
研究結(jié)果:
一、LncRNA BCRT1表達(dá)在乳腺癌中上調(diào)并與不良預(yù)后相關(guān)
    lncRNA BCRT1在乳腺癌中被上調(diào)，而lncRNA BCRT1的高表達(dá)與乳腺癌預(yù)后不良有關(guān)。

二、LncRNA BCRT1促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖和腫瘤生長(zhǎng)
    lncRNA BCRT1可以在體外和體內(nèi)促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖。

三、LncRNA BCRT1促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的移動(dòng)性和腫瘤轉(zhuǎn)移

四、LncRNA BCRT1在乳腺癌細(xì)胞中起miR-1303海綿的作用
    據(jù)報(bào)道，許多l(xiāng)ncRNA在調(diào)節(jié)miRNA的表達(dá)和生物學(xué)功能中起競(jìng)爭(zhēng)內(nèi)源性RNA(ceRNA)的作用。研究決定，該研究選擇miR-1303作為lncRNA BCRT1的抑制靶標(biāo)，以進(jìn)一步研究乳腺癌。

五、LncRNA BCRT1通過(guò)抑制miR-1303上調(diào)PTBP3表達(dá)
    使用miRDB，miRWalk，miRPathDB和TargetS-can數(shù)據(jù)庫(kù)，我們發(fā)現(xiàn)PTBP3是miR-1303的潛在靶標(biāo)。經(jīng)表明，PTBP3充當(dāng)乳腺癌的腫瘤啟動(dòng)子，而lncRNA BCRT1通過(guò)調(diào)節(jié)miR-1303在調(diào)節(jié)PTBP3的表達(dá)中起著重要作用。

六、外泌體lncRNA BCRT1促進(jìn)M2表型極化并增強(qiáng)巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)的腫瘤進(jìn)展
    先前的研究已經(jīng)報(bào)道，被認(rèn)為具有M2樣表型的腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAM)是腫瘤微環(huán)境(TME)中最豐富的免疫相關(guān)細(xì)胞，并通過(guò)介導(dǎo)血管生成，轉(zhuǎn)移和免疫來(lái)參與腫瘤發(fā)展。我們?cè)u(píng)估了lncRNA BCRT1，M1標(biāo)記和M2標(biāo)記在非極化巨噬細(xì)胞，LPS /INF-γ誘導(dǎo)的M1巨噬細(xì)胞和IL-4 / IL-13誘導(dǎo)的M2巨噬細(xì)胞中的表達(dá)。然后，我們?cè)噲D研究介導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞和巨噬細(xì)胞之間的通信的機(jī)制。各種研究報(bào)道，lncRNAs可以被外泌體轉(zhuǎn)移以調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境。這些結(jié)果表明lncRNA BCRT1可以通過(guò)外泌體轉(zhuǎn)移，從而促進(jìn)M2表型極化并增強(qiáng)其腫瘤促進(jìn)功能。

七、低氧條件下LncRNA BCRT1受HIF-1α轉(zhuǎn)錄調(diào)控
    缺氧是各種癌癥的主要腫瘤內(nèi)特征之一，一些研究表明，癌癥的低氧微環(huán)境可能是某些lncRNA異常表達(dá)的原因。為了研究lncRNA BCRT1是否為缺氧敏感的lncRNA，及一系列的相關(guān)機(jī)制，乳腺癌細(xì)胞經(jīng)過(guò)缺氧或常氧處理48小時(shí)。研究結(jié)果表明，低氧通過(guò)與啟動(dòng)子上的HRE1直接結(jié)合而由HIF-1α轉(zhuǎn)錄調(diào)控lncRNA BCRT1的表達(dá)。

八、LncRNA BCRT1介導(dǎo)低氧誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞惡性特性
    缺氧是腫瘤微環(huán)境的標(biāo)志，并與多種實(shí)體瘤的增殖，轉(zhuǎn)移和耐藥性有關(guān)。通過(guò)缺氧處理研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA BCRT1可能參與缺氧誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)功能。

結(jié) 論:
    1.LncRNA-BCRT1通過(guò)與miR-1303競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合發(fā)揮腫瘤啟動(dòng)子的作用，保護(hù)PTBP3不被降解，從而促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞在體內(nèi)外的生長(zhǎng)和進(jìn)展。
    2.lncRNA-BCRT1可以通過(guò)外泌體轉(zhuǎn)移到巨噬細(xì)胞中，促進(jìn)M2極化，增強(qiáng)其對(duì)腫瘤進(jìn)展的作用。
    3.lncRNA-BCRT1是通過(guò)HIF-1α依賴性轉(zhuǎn)錄調(diào)控在缺氧條件下誘導(dǎo)的，從而促進(jìn)了缺氧誘導(dǎo)的EMT。
    4.研究結(jié)果為乳腺癌的轉(zhuǎn)移機(jī)制提供了新的見(jiàn)解，為乳腺癌的治療提供了一個(gè)有希望的靶點(diǎn)。