小膠質(zhì)外泌體與帕金森氏病
帕金森氏病的病理特征包括黑質(zhì)中多巴胺能神經(jīng)元的丟失和突觸核蛋白（a-syn）的積累。小膠質(zhì)細(xì)胞是大腦中的主要免疫細(xì)胞，在帕金森氏癥中吞噬死細(xì)胞并幫助清除錯(cuò)誤折疊的a-syn聚集體。分泌外泌體是小膠質(zhì)細(xì)胞抗原呈遞和釋放機(jī)制的一部分。小膠質(zhì)外泌體是否影響帕金森氏病，這篇文章來(lái)為大家解答。
技術(shù)路線:
結(jié)果:
1. 外泌體介導(dǎo)神經(jīng)元之間的a-syn的傳播
PFF或PFF/LPS組合處理的小膠質(zhì)細(xì)胞中檢測(cè)到a-syn，表明小膠質(zhì)細(xì)胞可以攝取PFF，但缺乏有效降解纖維性a-syn的能力。LPS、PFF、LPS/PFF處理的小膠質(zhì)細(xì)胞增加了外泌體的釋放，PFF增加外泌體中的a-syn水平，PFF和LPS共處理增加最多，表明外泌體可能在消除細(xì)胞內(nèi)異常a-syn中發(fā)揮重要作用。PFF處理小膠質(zhì)細(xì)胞衍生的外泌體中可檢測(cè)到具有神經(jīng)毒性的寡聚a-syn的存在。這些表明PFF處理的小膠質(zhì)細(xì)胞釋放包含a-syn的外泌體，LPS進(jìn)一步增強(qiáng)PPF的效應(yīng)。
2. 外泌體介導(dǎo)a-syn在小膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元之間的傳遞
外泌體EF（來(lái)自PFF處理的小膠質(zhì)細(xì)胞），和EF-c（未治療的小膠質(zhì)細(xì)胞的外泌體）或無(wú)外泌體條件培養(yǎng)基分別與皮層神經(jīng)元孵育4天。TX-100不溶性a-syn在受體神經(jīng)元中的聚集在EF組顯著增加，而可溶性內(nèi)源性a-syn減少，表明包含a-syn的外泌體招募內(nèi)源性a-syn形成不溶性。
3. 外泌體合成的抑制減少a-syn從小膠質(zhì)細(xì)胞到神經(jīng)元的傳遞
外泌體抑制劑GW4869處理小膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)現(xiàn)外泌體的分泌減少，外泌體進(jìn)入神經(jīng)元明顯減少，a-syn聚集減少，減少TX-100不溶性a-syn，提示降低小膠質(zhì)細(xì)胞釋放含a-syn的外泌體可減少a-syn擴(kuò)散到神經(jīng)元。
4. 小膠質(zhì)細(xì)胞耗竭抑制PFF誘導(dǎo)的a-syn在體內(nèi)傳播
小鼠背側(cè)紋狀體立體定向注射PFF 30天后，p-a-syn積累存在于大腦多個(gè)區(qū)域，SN和紋狀體中的Iba1陽(yáng)性小膠質(zhì)細(xì)胞增加，表明小膠質(zhì)細(xì)胞參與了a-syn的傳播。消耗小膠質(zhì)細(xì)胞藥物PLX3397喂食老鼠處理大大減少大腦中Iba1陽(yáng)性小膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量。PFF + plx3397處理的小鼠SN和紋狀體中iba1陽(yáng)性的小膠質(zhì)細(xì)胞減少，異常p-a-syn聚集明顯減少，僅PLX3397處理沒(méi)有影響。這些表明小膠質(zhì)細(xì)胞耗竭抑制a-syn聚合和傳輸。
5. 小膠質(zhì)外泌體介導(dǎo)a-syn在大腦中傳播
注射EF的小鼠大腦可檢測(cè)到p-a-syn的積累，多巴胺能終密度減少，紋狀體多巴胺總含量減少，同側(cè)SNpc中TH陽(yáng)性細(xì)胞相應(yīng)丟失，這些表明小膠質(zhì)外泌體在黑質(zhì)紋狀體通路中以一種依賴于時(shí)間的方式觸發(fā)逆行細(xì)胞死亡。
檢測(cè)到小鼠的行為變化，發(fā)現(xiàn)后肢的支撐基礎(chǔ)增加，平均步行速度減少，兩只腳的爪面積增加。以上這些變化表明步行速度減少，總體活動(dòng)沒(méi)有明顯改變。這些表明小膠質(zhì)細(xì)胞外泌體a-syn與帕金森病的進(jìn)展有關(guān)。
6. 促炎細(xì)胞因子增強(qiáng)小膠質(zhì)外泌體誘導(dǎo)的a-syn的聚集
小膠質(zhì)細(xì)胞活化同時(shí)釋放促炎因子，EF與促炎細(xì)胞因子共處理神經(jīng)元細(xì)胞增加TX-100不溶性內(nèi)源性a-syn，表明EF介導(dǎo)a-syn傳輸，小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)加速這一過(guò)程。
7. PELI1介導(dǎo)的溶酶體故障導(dǎo)致小膠質(zhì)細(xì)胞自噬通量失調(diào)和外泌體分泌
自噬是a-syn降解的重要途徑，觀察到PFF處理的BV-2細(xì)胞誘導(dǎo)自噬體積累。研究發(fā)現(xiàn)，在PF F處理的BV-2細(xì)胞中溶酶體結(jié)構(gòu)蛋白LAMP2的水平明顯減少，CD63 + LC3 +濃度增加，這些表明PFF引起溶酶體功能障礙。PFF處理BV-2細(xì)胞E3泛素連接酶PELI1水平增加，在HA泛素存在下，LAMP2被有效多泛素化，而PELI1過(guò)表達(dá)增強(qiáng)LAMP2的降解。沉默PELI1逆轉(zhuǎn)PFF誘導(dǎo)的LAMP2減少，減弱自噬體積累，恢復(fù)自噬通量，并減少自噬體與MVB的融合。
8. 帕金森氏癥患者CSF小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞來(lái)源外泌體誘導(dǎo)神經(jīng)元a-syn聚集
CSF中CD11b +外泌體超過(guò)總外泌體，帕金森氏病和MSA患者中小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞外泌體中總a-syn的含量。CD11b +外泌體與皮質(zhì)神經(jīng)元一起孵育，觀察到帕金森氏病和MSA患者的CD11b +外泌體誘導(dǎo)TX-100不溶性a-syn。這些表明小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞衍生的外泌體含有a-syn，在細(xì)胞間傳播中起重要作用。
