巨噬細胞外泌體在肝癌中研究進展

        肝癌（HCC）是癌癥死亡的第二大原因，嚴(yán)重威脅人類健康。腫瘤的發(fā)生、進展和轉(zhuǎn)移受腫瘤微環(huán)境的影響。巨噬細胞是最常見的免疫細胞，是腫瘤微環(huán)境中的重要組成部分。巨噬細胞外泌體在HCC中的研究新進展來了。

研究思路:

結(jié)果:
1. 與巨噬細胞共培養(yǎng)后肝癌細胞的侵襲能力增加
        研究浸潤性巨噬細胞對肝癌的潛在影響。PMA誘導(dǎo)THP-1細胞中的巨噬細胞，共培養(yǎng)THP-1巨噬細胞與肝癌細胞，M2巨噬細胞標(biāo)記（CD206，CD163，TGFβ，Arginase-1）增加，肝癌細胞的侵襲能力增加。MTT分析表明巨噬細胞共培養(yǎng)使肝癌細胞的增殖能力下降，因此侵襲能力的增加不是由于增殖能力的增加所致。以上表明，浸潤的巨噬細胞可增加肝癌細胞侵襲能力。

2. 浸潤性巨噬細胞通過改變AR表達增加肝癌細胞侵襲
        最近研究表明AR可能在改變肝癌進展中起關(guān)鍵作用。分析AR的臨床意義，AR 在原發(fā)性腫瘤中表達較低，隨著腫瘤分期的增加，AR表達減少。共培養(yǎng)后腫瘤細胞中AR表達降低。添加AR-cDNA減少浸潤巨噬細胞誘導(dǎo)的肝癌細胞侵襲，而添加AR-shRNA導(dǎo)致肝癌細胞侵襲增加。以上提示：浸潤的巨噬細胞可能通過抑制肝癌細胞AR表達來增加肝癌細胞侵襲。

3. 浸潤性巨噬細胞通過改變miRNA降低肝癌細胞中AR表達
        共培養(yǎng)導(dǎo)致肝癌細胞中的AR表達減少。檢測Cycloheximide處理的肝癌細胞中AR蛋白水平，發(fā)現(xiàn)在對照組（非共培養(yǎng)）和共培養(yǎng)組之間沒差異。表明巨噬細胞可能通過轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄后調(diào)控調(diào)節(jié)肝癌細胞AR mRNA水平。共培養(yǎng)后肝癌細胞中miR-92a-2-5p，miR-3153，miR-589-5p的表達增加，miR-92a-2-5p和miR-3153可逆轉(zhuǎn)共培養(yǎng)對AR的影響以及共培養(yǎng)后肝癌細胞的侵襲能力。這些表明，巨噬細胞可能通過增加miR-92a-2-5p和miR-3153表達降低肝癌細胞AR表達。

4. 巨噬細胞通過外泌體增加miRNA表達
        miRNA可以被外泌體從巨噬細胞轉(zhuǎn)運到鄰近腫瘤細胞。巨噬細胞中高表達miR-92a-2-5p和miR-3153，抑制巨噬細胞中兩個miRNA，與肝癌細胞共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)可逆轉(zhuǎn)共培養(yǎng)對肝癌細胞的影響。收集M2-型巨噬細胞培養(yǎng)基，加入肝癌細胞中，發(fā)現(xiàn)巨噬細胞外泌體導(dǎo)致肝癌細胞中AR表達減少，加入外泌體分泌抑制劑（GW4869），巨噬細胞失去影響癌細胞的能力。轉(zhuǎn)染pLKO-miR-92a-2-5p抑制劑后或pLKO-miR-3153抑制劑，發(fā)現(xiàn)巨噬細胞外泌體中miR-92a-2表達降低，表明外泌體可將miR-92a-2-5p從巨噬細胞轉(zhuǎn)運到肝癌細胞。pLKO-miR-92a-2-5p抑制劑逆轉(zhuǎn)巨噬細胞的誘導(dǎo)肝細胞侵襲能力，過表達miR-92a-2-5p后AR表達降低且癌細胞的侵襲能力增加?？傊?，巨噬細胞通過轉(zhuǎn)運miR-92a-來減少肝癌細胞的AR表達，從而增加腫瘤侵襲能力。

5. miR-92a-2-5p直接靶向AR mRNA的3'UTR改變AR表達
        搜索AR mRNA 3'UTR上的miR-92a-2-5p潛在靶向位點，螢光素酶報告檢測以及敲除miR-92a-2-5p驗證miR-92a-2-5p直接靶向AR mRNA的3'UTR以抑制其蛋白表達。

6. 巨噬細胞/外泌體/ miR-92a-2-5p / AR軸通過改變PHLPP /p-AKT /β-catenin信號調(diào)控肝癌細胞浸潤能力
        檢測共培養(yǎng)中癌癥相關(guān)蛋白質(zhì)的表達，發(fā)現(xiàn)β-catenin與AR的變化最一致。原發(fā)性腫瘤中β-catenin表達增加，AR可通過轉(zhuǎn)錄調(diào)控PHLPP, PHLPP可通過去磷酸化滅活A(yù)KT，提高前列腺癌的侵襲能力，而p-AKT /β-catenin信號與腫瘤進展有關(guān)。共培養(yǎng)后癌細胞中p-AKT表達增加，PHLPP水平降低。改變巨噬細胞中miR-92a-5p表達導(dǎo)致相似的變化，加入AKT或β-catenin抑制劑，巨噬細胞的作用被阻斷。以上表明，巨噬細胞/外泌體/ miR-92a-2-5p / AR軸可通過改變PHLPP / p-AKT /β-catenin信號來調(diào)節(jié)肝癌細胞的侵襲。

7. 臨床前研究：利用miR-92a-2-5p抑制劑靶向此信號通路抑制肝癌進展
        構(gòu)建帶有熒光素酶報道基因的癌細胞，pLKO-miR-92a-2-5p抑制劑轉(zhuǎn)染THP-1細胞，共培養(yǎng)細胞后進行異種移植。發(fā)現(xiàn)巨噬細胞處理肝細胞組明顯快于對照組，添加pLKO-miR-92a-2-5p抑制劑可部分抑制腫瘤生長，SK-HEP-1-Luc和THP-1-pLKO共培養(yǎng)組轉(zhuǎn)移小鼠比其他兩組更多，AR表達降低。分析miR-92a-2-5p在TCGA數(shù)據(jù)庫中的HCC臨床樣品的表達，發(fā)現(xiàn)miR-92a在腫瘤中表達增加。HCC患者低miR-92a-2-5p表達的生存時間比高miR-92a-2-5p表達患者長。表明巨噬細胞miR-92a-2-5p改變AR促進肝癌進展。

參考文獻：
The miR-92a-2-5p in exosomes from macrophages increases liver cancer cells invasion via altering the AR/PHLPP/p-AKT/β-catenin signaling