不服不行！2張圖發(fā)7分——免疫自噬調(diào)控

科研成果的發(fā)表是往往數(shù)據(jù)量的多少和發(fā)表的影響因子成正比。但是，你是否知道short communication這類文章的存在呢？Short communication，即研究簡(jiǎn)報(bào)，一般不超過2000-3000字，用來發(fā)布較有新意的熱點(diǎn)，格式和Article或Research差不多。雖然其篇幅通常較短，但其研究成果的含金量同樣可以很重，這取決于雜志的規(guī)定。例如，nature publishing group（NPG）下面的期刊，無論文章有多短，NPG的文章都是新的、重要的研究，它們是高品質(zhì)的，符合特定研究群體興趣的。

當(dāng)然，這里特別介紹short communication是因?yàn)橛锌赡芡恫恢?分的orignical article，但是縮減字?jǐn)?shù)能投中5分多雜志的short communication。然而，特別需要注意的是，short communication發(fā)表后能否畢業(yè)以及能否用于職稱評(píng)定，這取決于每個(gè)學(xué)校每個(gè)單位的具體規(guī)定，友友們需要去咨詢自己學(xué)校的相關(guān)部門。

下面為大家介紹一篇于2022年10月發(fā)表在《Journal of Investigative Dermatology》IF：7.590雜志上的short communication。該文主要結(jié)果圖是2張，附圖有3張，下面一起來看看吧！

前言：

在粘膜表面，未成熟的常駐樹突狀細(xì)胞（DC）和朗格漢斯細(xì)胞（LC）是最先被HIV-1病毒感染的細(xì)胞類型。由于DC和LC的自噬功能它們可以限制早期HIV-1感染通過病毒進(jìn)入限制的激活機(jī)制。在早期感染中，DC識(shí)別病毒并釋放細(xì)胞因子，包括干擾素IFN和TGF-β，以低于HIV-1感染。HIV-1反式感染，即HIV-1被DC捕獲隨后被傳遞到T細(xì)胞的過程。

為更好地了解細(xì)胞因子在HIV-1反式感染調(diào)控中的作用，作者在DC至CD4+ T細(xì)胞轉(zhuǎn)移系統(tǒng)中的單核細(xì)胞來源DC（MDDC）中進(jìn)行siRNA篩選，并監(jiān)測(cè)HIV-1在CD4+ T細(xì)胞中的轉(zhuǎn)移。利用針對(duì)319個(gè)與細(xì)胞因子和趨化因子功能相關(guān)的基因的Dharmacon人類siRNA文庫，確定了巨噬細(xì)胞遷移抑制因子（MIF）是抑制HIV-1向CD4+ T細(xì)胞反式感染的強(qiáng)限制性候選因子。數(shù)據(jù)顯示，MIF通過誘導(dǎo)自噬機(jī)制作為宿主防御病毒的一種機(jī)制，在從MDDC到CD4+ T淋巴細(xì)胞的HIV-1反式感染的限制中發(fā)揮保護(hù)作用。

本文技術(shù)路線如下：

主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：

CD4+和CD14+細(xì)胞在健康捐獻(xiàn)者中富集。CD14+在添加GM-CSF/IL-4的培養(yǎng)基中分化為MDDCs，CD4+則在IL-2培養(yǎng)基中維持生長。在2輪siRNA轉(zhuǎn)染后，MDDC接種全長HIV-1，并與SupT1 T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)。作者使用CD4高表達(dá)的SupT1細(xì)胞，使其成為適合大規(guī)模siRNA文庫篩選的同質(zhì)細(xì)胞群。感染48小時(shí)后，對(duì)樣品進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)HIV-1 p24衣殼蛋白染色，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD4+ p24+細(xì)胞比例，判斷病毒轉(zhuǎn)移程度（附圖1A）。變化的命中閾值為-20%/+50%，并生成了134個(gè)候選基因列表，包括28個(gè)限制性基因，其向CD4+ T細(xì)胞的轉(zhuǎn)移增加，106個(gè)許可性基因的轉(zhuǎn)移減少（附圖1B）。非靶點(diǎn)siRNA對(duì)照組中MDDC分化標(biāo)志物未見明顯變化，如DC-SIGN、CD83和CD86表達(dá)不變（附圖2A-2C）。使用兩種統(tǒng)計(jì)法對(duì)此進(jìn)行歸一化，將數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換成z分?jǐn)?shù)和中位數(shù)絕對(duì)偏差。使用MAD歸一化具有最高的敏感性和特異性（附圖1C-1E）。

附圖1 用統(tǒng)計(jì)方法分析初級(jí)和次級(jí)屏幕數(shù)據(jù)

附圖2 MIF抑制時(shí)MDDC的激活狀態(tài)

MIF是一種促炎細(xì)胞因子，在抗微生物宿主防御中具有先天功能，在感染性和自身炎癥性疾病的發(fā)病機(jī)制中具有適應(yīng)性作用。在MDDC siRNA MIF處理后，MDDCs和CD4+ SupT1細(xì)胞中都能檢測(cè)到HIV-1 p24的增加，這表明MIF至少在一定程度上促進(jìn)了病毒顆粒在MDDCs中的積累和向T細(xì)胞轉(zhuǎn)移的增加（附圖3A）。

附圖3 MIF抑制后MDDC和T細(xì)胞的HIV-1轉(zhuǎn)移增加

接下來的所有實(shí)驗(yàn)作者都使用了自體的原生CD4+ T細(xì)胞來再現(xiàn)更生理的環(huán)境。并確認(rèn)MIF是最強(qiáng)的siRNA候選基因（圖1A-1B）。用10C3抗MIF中和抗體或選擇性小分子MIF抑制劑4-IPP預(yù)處理MDDC，分別阻斷或抑制MIF。與抗MIF抗體或4-IPP孵育后，未觀察到MDDC成熟或細(xì)胞活力的顯著變化（附圖2D-2F）。中和抗MIF治療后，HIV-1從MDDC向CD4+ T細(xì)胞的轉(zhuǎn)移增加，4-IPP MIF化學(xué)抑制處理則增加約4倍（圖1C-1D）。在4-IPP處理的MDDCs中也可以直接觀察到p24+病毒顆粒的積累，盡管外源性重組MIF處理沒有效果（附圖3B-3C）。總之，這些結(jié)果說明使用三種不同的DC功能喪失試驗(yàn)證實(shí)MIF是HIV-1向CD4+ T細(xì)胞反式感染過程中的限制性候選基因。

圖1 MDDC中MIF siRNA處理減少HIV-1細(xì)胞向自體CD4+T細(xì)胞的轉(zhuǎn)移

作者之前已證明HIV-1在DC中誘導(dǎo)LC3+免疫兩性體的關(guān)閉和自噬。在LC缺失的情況下，感染的MDDC失去了通過自噬對(duì)HIV-1的降解能力，增加了HIV-1向CD4+T細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。所以，作者這里探究了自噬在MDDC調(diào)控HIV-1反式感染中的作用。MDDC用4-IPP抑制劑處理或雷帕霉素+氯喹（Rap+CQ）陽性對(duì)照處理。Rap激活自噬，CQ允許LC3在Rap刺激自噬后積累。然后觀察自噬體標(biāo)記物L(fēng)C3?/β。與陽性對(duì)照（Rap+CQ）相比，過夜4-IPP處理不會(huì)誘導(dǎo)MDDC中LC3+的表達(dá)（圖2A-2B）。此外，Rap+CQ處理過程中加入4-IPP抑制了LC3-誘導(dǎo)的表達(dá)，導(dǎo)致自噬水平與對(duì)照組相當(dāng)，提示LC3+自噬體的形成是一個(gè)MIF依賴的過程（圖2C-2D）。 這些結(jié)果提示MIF的表達(dá)參與調(diào)控MDDC中LC3+自噬小體的形成，從而刺激DC中的自噬。MIF的缺失導(dǎo)致MDDC中LC3+自噬體的減少，細(xì)胞內(nèi)HIV-1的積累和轉(zhuǎn)移更多至CD4 + T細(xì)胞。

圖2 MIF對(duì)MDDC自噬通量的調(diào)節(jié)作用

總之，使用siRNA，確定了MIF作為抗病毒細(xì)胞因子介導(dǎo)劑，通過自噬作用在細(xì)胞內(nèi)降解HIV-1，并隨后減少HIV-1從MDDC到CD4+ T細(xì)胞的細(xì)胞間轉(zhuǎn)移，對(duì)DC中的HIV-1感染具有保護(hù)功能。

參考文獻(xiàn)：

Caucheteux Stephan M., Wheeldon James., Bayliss Rebecca., Piguet Vincent.(2022). Macrophage Migration Inhibitory Factor restriction of HIV-1 trans-infection from Dendritic Cells to CD4+ T-cells via regulation of autophagy. J Invest Dermatol, undefined(undefined), undefined. doi:10.1016/j.jid.2022.09.655