阻斷長鏈非編碼RNA HOTAIR信號軸可改善化療誘導(dǎo)的膀胱癌惡病質(zhì)

癌癥惡病質(zhì)被定義為與癌癥進展相關(guān)的復(fù)雜代謝紊亂，其特征是體重減輕和骨骼肌萎縮伴或不伴脂肪量減少。值得注意的是，大約三分之一的癌癥相關(guān)死亡是由惡病質(zhì)而不是腫瘤負(fù)擔(dān)造成的。惡病質(zhì)對患者的生活質(zhì)量和身體功能產(chǎn)生負(fù)面影響，并與預(yù)后和生存率低有關(guān)。雖然在了解惡病質(zhì)的病理生理學(xué)方面取得了很大進展，但目前尚無特定的治療方法或干預(yù)措施。該研究發(fā)表于《Journal of Biomedical Science》，IF: 12.771。

技術(shù)路線：

主要研究結(jié)果：

1. ProT和HOTAIR在膀胱腫瘤中的表達(dá)升高，并顯示出正相關(guān)

為了研究HOTAIR及其潛在的上游EGFR-ProT軸對順鉑誘導(dǎo)的膀胱癌惡病質(zhì)的貢獻(xiàn)，我們首先詢問了HOTAIR，ProT和EGFR是否在臨床膀胱腫瘤組織中過表達(dá)。我們通過RT-qPCR檢查了它們在六對膀胱腫瘤組織和相應(yīng)相鄰正常組織中的表達(dá)水平。ProT（圖1a）和HOTAIR（圖1b）在腫瘤組織中的表達(dá)明顯高于正常組織對應(yīng)物。然而，與正常組織相比，膀胱腫瘤中EGFR的表達(dá)沒有顯著變化（圖1c）。我們進一步證實了它們在19例膀胱癌患者的腫瘤組織中的關(guān)聯(lián)。圖1d表明ProT表達(dá)與HOTAIR表達(dá)呈高度正相關(guān)（r = 0.8939，p < 0.0001）。此外，我們分析了TCGA膀胱癌隊列（n=408）的臨床數(shù)。我們使用腫瘤免疫估計資源（TIMER，https://cistrome.shinyapps.io/timer）網(wǎng)絡(luò)服務(wù)器的相關(guān)模塊檢查了膀胱腫瘤樣本中ProT（即PTMA基因）、HOTAIR和EGFR轉(zhuǎn)錄本之間的相互相關(guān)性。圖1e表明ProT和HOTAIR的表達(dá)水平呈正相關(guān)（r = 0.108，p = 0.029）。我們還檢查了ProT和HOTAIR在不同尿路上皮癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平，包括6種膀胱癌、1種前列腺癌（PC3）、1種腎癌（BFTC909）和1種正常尿路上皮（SV-HUC-1）細(xì)胞系。我們的結(jié)果表明，細(xì)胞系在ProT（圖1f）和HOTAIR（圖1g）的表達(dá)水平方面呈異質(zhì)性。在檢查的膀胱癌細(xì)胞系中，TCCSUP細(xì)胞相對表達(dá)最高水平，而J82和HT1197細(xì)胞表達(dá)最低水平，ProT和HOTAIR。此外，正常的尿路上皮SV-HUC-1細(xì)胞表達(dá)相對低水平的ProT，特別是HOTAIR。與從臨床腫瘤樣本中獲得的數(shù)據(jù)一致，ProT和HOTAIR在尿路上皮癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平也呈正相關(guān)（r = 0.7661，p = 0.0266）（圖1h）。總之，這些結(jié)果表明，ProT和HOTAIR的表達(dá)在臨床膀胱腫瘤樣本和癌細(xì)胞系中上調(diào)并呈正相關(guān)。

圖1 ProT和HOTAIR在膀胱腫瘤中的表達(dá)升高，并顯示出正相關(guān)

2. 順鉑治療增加EGFR和NF-κB活化，以及J82細(xì)胞中的ProT和HOTAIR表達(dá)，并且這些作用被EGFR抑制劑或ProT敲低所消除

鑒于EGFR在膀胱腫瘤中沒有顯著過度表達(dá)（圖1c）并且順鉑可以在過表達(dá)受體的各種細(xì)胞類型中誘導(dǎo)EGFR活化，我們考慮了順鉑誘導(dǎo)EGFR活化的可能性，導(dǎo)致所提出的ProT-NF-κB-HOTAIR信號軸上調(diào)，從而導(dǎo)致惡病質(zhì)相關(guān)的促炎細(xì)胞因子產(chǎn)生增加。我們用順鉑處理內(nèi)源性表達(dá)相對低水平的ProT和HOTAIR的J82細(xì)胞，并在磷酸化方面檢測EGFR活化。NF-κB的活化伴隨著其亞基p65（在Ser 536處）的磷酸化，活化的NF-κB反過來又易位到細(xì)胞核中以激活多種促炎基因表達(dá)。因此，我們檢查了順鉑處理的J82細(xì)胞中ProT和HOTAIR的表達(dá)以及NF-κB磷酸化。免疫印跡分析顯示，順鉑處理以劑量依賴性方式增加了磷酸化-EGFR（Tyr1068）、ProT和磷酸化-NF-κB p65（Ser536）的表達(dá)（圖2a）。為了確認(rèn)EGFR的激活作用于ProT-NF-κB-HOTAIR信號軸的上游，使用兩種EGFR激酶抑制劑吉非替尼和厄洛替尼在存在或不存在順鉑的情況下治療J82細(xì)胞。我們的結(jié)果表明，用吉非替尼或厄洛替尼治療逆轉(zhuǎn)了順鉑誘導(dǎo)的ProT和磷酸化-NF-κB p65蛋白的上調(diào)（圖2b），以及HOTAIR的表達(dá)（圖2c）。此外，我們使用慢病毒介導(dǎo)的ProT特異性shRNA遞送（shProT-17和-19）以及J82細(xì)胞中的對照shRNA（shLuc）來進一步鑒定ProT作為NF-κB-HOTAIR信號軸的上游調(diào)節(jié)因子。免疫印跡分析顯示，順鉑誘導(dǎo)的NF-κB磷酸化在ProT敲低J82細(xì)胞中被消除（圖2d）。值得注意的是，順鉑誘導(dǎo)的HOTAIR上調(diào)在ProT敲低細(xì)胞中也被廢除（圖2e）。綜上所述，這些結(jié)果表明順鉑可以上調(diào)ProT和HOTAIR的表達(dá)，并且EGFR和NF-κB的激活參與膀胱癌細(xì)胞的這一途徑。此外，順鉑處理通過EGFR-ProT軸上調(diào)HOTAIR。

圖2 順鉑治療通過膀胱癌細(xì)胞中的EGFR-ProT軸上調(diào)HOTAIR

3. ProT的過表達(dá)增加，而ProT的敲低降低，膀胱癌細(xì)胞中的HOTAIR表達(dá)和HOTAIR上調(diào)通過NF-κB抑制劑治療而降低

已經(jīng)證明ProT敲低J82細(xì)胞沒有誘導(dǎo)NF-κB磷酸化（圖2d）和HOTAIR上調(diào)（圖2e）在順鉑處理后，我們進一步在J82細(xì)胞（J82/ProT）中過表達(dá)ProT，以檢查其對NF-κB和HOTAIR表達(dá)的影響。正如預(yù)期的那樣，J82/ProT細(xì)胞表達(dá)更高水平的ProT mRNA（圖3a）和蛋白質(zhì)（圖3b），而用GFP和親本（模擬）細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞中的ProT表達(dá)處于相似水平。根據(jù)ProT敲低J82細(xì)胞的結(jié)果（圖2d），在J82細(xì)胞中，ProT的過表達(dá)增加了NF-κB磷酸化（圖3b）和HOTAIR表達(dá)（圖3c）。鑒于ProT可以誘導(dǎo)NF-κB活化，并且NF-κB可以在順鉑誘導(dǎo)的DNA損傷過程中上調(diào)HOTAIR表達(dá)，我們進一步使用NF-κB抑制劑來研究ProT對HOTAIR表達(dá)的影響是否需要NF-κB信號傳導(dǎo)。如圖3c所示，JSH-23抑制NF-κB p65的核易位，從而消除NF-κB信號傳導(dǎo)和TPCA-1，一種抑制NF-κB信號通路活化的激酶IKKβ抑制劑，可以逆轉(zhuǎn)ProT介導(dǎo)的J82細(xì)胞中HOTAIR表達(dá)的上調(diào)。值得注意的是，用這兩種NF-κB抑制劑治療不影響ProT表達(dá)，表明ProT作用于NF-κB信號通路的上游（圖3d）。為了進一步驗證ProT通過NF-κB信號上調(diào)HOTAIR表達(dá)，我們通過慢病毒介導(dǎo)的ProT特異性shRNA遞送沉默了ProT高表達(dá)TCCSUP膀胱癌細(xì)胞中的ProT表達(dá)，這被RT-qPCR證實（圖3e）和免疫印跡（圖3f）。值得注意的是，敲低ProT表達(dá)降低了NF-κB p65磷酸化（圖3f）和HOTAIR表達(dá)（圖3g）在 TCCSUP 細(xì)胞中。此外，用NF-κB抑制劑處理也降低了TCCSUP細(xì)胞中的HOTAIR表達(dá)（圖3h），這與ProT敲低的效果相似（圖3g）。總的來說，使用ProT過表達(dá)和敲低方法，我們表明抑制NF-κB活化消除了ProT誘導(dǎo)的HOTAIR表達(dá)，表明ProT通過激活NF-κB信號通路上調(diào)HOTAIR表達(dá)。因此，根據(jù)從圖2和3獲得的數(shù)據(jù)，我們得出結(jié)論，順鉑誘導(dǎo)的HOTAIR上調(diào)是通過EGFR-ProT-NF-κB-HOTAIR信號軸介導(dǎo)的。

圖3 ProT通過膀胱癌細(xì)胞中的NF-κB激活上調(diào)HOTAIR

4. HOTAIR的過表達(dá)增強J82細(xì)胞中的細(xì)胞增殖和促炎細(xì)胞因子表達(dá)

由于HOTAIR可能在炎癥和免疫反應(yīng)中發(fā)揮作用，我們進一步研究了HOTAIR在表達(dá)導(dǎo)致癌癥惡病質(zhì)的促炎細(xì)胞因子中的作用。我們生成了HOTAIR過表達(dá)J82（J82/HOTAIR-2和-5）細(xì)胞及其載體對照（J82/GFP）細(xì)胞，并比較了它們的增殖速率和細(xì)胞因子表達(dá)水平。圖4a證實HOTAIR在J82/HOTAIR細(xì)胞中的表達(dá)水平遠(yuǎn)高于J82/GFP細(xì)胞。J82/HOTAIR細(xì)胞的增殖速度明顯快于J82/GFP細(xì)胞或親本細(xì)胞（圖4b）。此外，J82/HOTAIR細(xì)胞顯著表達(dá)更高水平的IL-6（圖4c）、TNF-α（圖4d）和IL-1β（圖4e）比J82/GFP細(xì)胞。鑒于順鉑上調(diào)HOTAIR表達(dá)和HOTAIR增強J82細(xì)胞中的促炎細(xì)胞因子表達(dá)，我們接下來確定順鉑治療是否上調(diào)下游促炎細(xì)胞因子，以及EGFR抑制劑是否可以逆轉(zhuǎn)這種上調(diào)。用吉非替尼或厄洛替尼治療消除了順鉑誘導(dǎo)的IL-6上調(diào)（圖4f）、TNF-α（圖4g）和IL-1β（圖4h）在J82細(xì)胞中的表達(dá)。由于ProT充當(dāng)NF-κB/HOTAIR軸的上游調(diào)節(jié)器（圖3），我們驗證了J82/ProT細(xì)胞表達(dá)更高水平的IL-6（圖4i）、TNF-α（圖4j）和IL-1β（圖4k）與載體對照J(rèn)82/GFP細(xì)胞相比。綜上所述，這些結(jié)果表明，在人膀胱癌細(xì)胞中強制表達(dá)HOTAIR或ProT可增強IL-6，TNF-α和IL-1β的表達(dá)。此外，順鉑治療后人膀胱癌細(xì)胞中促炎細(xì)胞因子的表達(dá)進一步升高，EGFR抑制劑可消除其作用。

圖4 HOTAIR過表達(dá)、順鉑治療和ProT過表達(dá)上調(diào)人J82膀胱癌細(xì)胞中的促炎細(xì)胞因子表達(dá)

5. 敲低Hotair可降低MBT-2細(xì)胞中的細(xì)胞增殖和促炎細(xì)胞因子表達(dá)

在證明了人HOTAIR對人膀胱癌細(xì)胞中惡病質(zhì)相關(guān)促炎細(xì)胞因子表達(dá)的影響后，我們試圖確認(rèn)小鼠Hotair在小鼠膀胱癌細(xì)胞中是否具有與人HOTAIR相似的效果。由于質(zhì)粒構(gòu)建體對MBT-2細(xì)胞進行瞬時轉(zhuǎn)染沒有達(dá)到較高的轉(zhuǎn)染效率，因此我們使用慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)介導(dǎo)HotairCRISPRi基因沉默。選擇轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞并在嘌呤霉素處理下擴增，以獲得MBT-2/CSi-HOTAIR和載體對照MBT-2/CSi-GFP細(xì)胞。慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)和嘌呤霉素選擇后，載體對照和親本細(xì)胞之間的一些生物學(xué)特性可能不同。因此，將我們的敲低細(xì)胞與它們的載體對照細(xì)胞而不是親本細(xì)胞進行比較。我們測試了CRISPRi介導(dǎo)的Hotair表達(dá)敲低是否可以降低小鼠MBT-2膀胱癌細(xì)胞中下游促炎細(xì)胞因子的表達(dá)，這些細(xì)胞因子表達(dá)這種lncRNA水平升高。圖5a顯示了MBT-2/CSi-Hotair-F4和-F6電池與MBT-2/CSi-GFP電池相比的HOTAIR敲低確認(rèn)。HOTAIR敲低細(xì)胞中的細(xì)胞增殖速度慢于GFP敲低細(xì)胞或親本細(xì)胞（圖5b）。此外，HOTAIR敲低MBT-2細(xì)胞表達(dá)較低水平的IL-6（圖5c）、TNF-α（圖5d）和IL-1β（圖5e）與GFP敲低細(xì)胞相比，盡管IL-1β的差異并不顯著（圖5c，d，e）。值得注意的是，順鉑治療顯著促進了這些細(xì)胞因子在GFP敲低細(xì)胞中的表達(dá)，而不是HOTAIR敲低細(xì)胞（圖5c，d，e），表明Hotair的敲低消除了順鉑誘導(dǎo)的小鼠膀胱癌細(xì)胞中IL-6，TNF-α和IL-1β的上調(diào)?？偟膩碚f，這些結(jié)果表明，敲低Hotair可降低細(xì)胞增殖和促炎細(xì)胞因子表達(dá)，并減少順鉑誘導(dǎo)的MBT-2細(xì)胞中促炎細(xì)胞因子的上調(diào)。此外，我們的研究結(jié)果表明，小鼠Hotair在誘導(dǎo)惡病質(zhì)相關(guān)促炎細(xì)胞因子表達(dá)方面具有與人類HOTAIR相似的生物學(xué)效應(yīng)。

圖5 敲低Hotair可減少小鼠MBT-2膀胱癌細(xì)胞中的細(xì)胞增殖并下調(diào)促炎細(xì)胞因子表達(dá)

6. HOTAIR與順鉑誘導(dǎo)的膀胱癌骨骼肌萎縮呈正相關(guān)

鑒于癌癥惡病質(zhì)最常見的體外肌肉模型是用從培養(yǎng)的癌細(xì)胞中收集的CM治療小鼠C2C12肌管，并且IL-6和TNF-α與癌癥惡病質(zhì)有關(guān)，我們接下來研究了HOTAIR表達(dá)與骨骼肌萎縮的相關(guān)性。在存在或不存在順鉑的情況下，用J82/HOTAIR，J82/GFP或親本J82細(xì)胞的CM處理C2C12肌管，并通過測量肌管直徑評估肌肉萎縮。重組小鼠TNF-α作為誘導(dǎo)C2C12肌管萎縮的陽性對照。鑒于惡病質(zhì)患者血漿中所含的促炎細(xì)胞因子可以在C2C12細(xì)胞中誘導(dǎo)NF-κB活化，并且人TNF-α和IL-6對人和鼠細(xì)胞均有活性，我們測試了這兩種人細(xì)胞因子是否對C2C12肌管有影響。我們的結(jié)果證實，人TNF-α和IL-6能夠誘導(dǎo)小鼠肌管萎縮（圖6a，b），表明體外小鼠C2C12肌管模型可用于評估人類癌細(xì)胞誘導(dǎo)的癌癥惡病質(zhì)。與從載體對照細(xì)胞暴露于CM的C2C12肌管的平均直徑相比，暴露于J82/HOTAIR細(xì)胞的CM的平均直徑較低（圖6c，d）。此外，順鉑處理進一步降低了暴露于J82細(xì)胞來源CM的C2C12肌管的平均直徑（圖6c，d）。除了檢查HOTAIR過表達(dá)后人J82細(xì)胞的CM外，我們還評估了Hotair的CRISPRi敲低后小鼠MBT-2細(xì)胞來源的CM對C2C12肌管萎縮的影響。與從J82細(xì)胞獲得的數(shù)據(jù)一致（圖6c，d），與培養(yǎng)基對照相比，用GFP敲低MBT-2細(xì)胞的CM處理顯著降低了C2C12肌管的平均直徑（圖6e，f）。值得注意的是，Hotair的敲低將肌管直徑恢復(fù)到暴露于培養(yǎng)基對照的對照細(xì)胞直徑的相似水平。此外，順鉑治療導(dǎo)致每次治療中肌管直徑的進一步減小。然而，在MBT-2細(xì)胞中敲低Hotair減輕了暴露于順鉑的MBT-2細(xì)胞CM誘導(dǎo)的肌管直徑減小。C2C12肌管測定的結(jié)果表明，人和小鼠膀胱癌細(xì)胞產(chǎn)生促進骨骼肌萎縮的因子，特別是在順鉑存在下。肌肉特異性E3泛素連接酶MuRF-1、UBR2（也稱為E3α-II）和趾激素-1在介導(dǎo)癌癥惡病質(zhì)中肌肉蛋白的降解中起關(guān)鍵作用。因此，我們進一步檢查了這些E3泛素連接酶在用MBT-2細(xì)胞或其衍生物的CM處理的C2C12肌管中的表達(dá)。免疫印跡分析顯示，在用MBT-2或MBT-2/CSi-GFP細(xì)胞CM處理的細(xì)胞中，MuRF-1、UBR2和atrogin-1的表達(dá)增加。值得注意的是，Hotair的敲低減輕了MBT-2細(xì)胞CM誘導(dǎo)的MuRF-1，UBR2和atrogin-1的上調(diào)（圖6g，h）。綜上所述，使用C2C12肌管測定，我們證明HOTAIR在順鉑誘導(dǎo)的骨骼肌萎縮中起關(guān)鍵作用，這可能是通過上調(diào)萎縮相關(guān)的E3泛素連接酶介導(dǎo)的。

圖6 HOTAIR過度表達(dá)膀胱癌細(xì)胞的CM，特別是在順鉑存在下促進肌肉萎縮

7. 在膀胱腫瘤荷載小鼠中敲低Hotair可減弱順鉑誘導(dǎo)的癌癥惡病質(zhì)

為了確認(rèn)體外結(jié)果的相關(guān)性，我們使用同源MBT-2膀胱腫瘤模型來研究Hotair在小鼠腫瘤中的敲低是否可以改善接受順鉑化療的荷瘤小鼠的體重減輕和骨骼肌萎縮。協(xié)議時間表如圖7a所示。在植入MBT-2細(xì)胞的所有小鼠組中都注意到體重減輕（減去估計的腫瘤重量后）（圖7b）。在實驗結(jié)束時處死小鼠后計算相對體重變化（減去第0天絕對腫瘤重量/體重后的體重）。雖然攜帶MBT-2或MBT-2/CSi-GFP腫瘤的小鼠體重減輕超過20%，但與攜帶MBT-2/CSi-GFP腫瘤的小鼠相比，MBT-2腫瘤中Hotair的敲低顯著改善了荷瘤小鼠的體重減輕第29天（圖7c）。值得注意的是，腫瘤體積要小得多（圖7d），降低血清IL-6水平（圖7e）與健康小鼠相當(dāng)，小腿周長更大（圖7f）在MBT-2/CSi-HOTAIR小鼠中檢測到，而不是在MBT-2/CSi-GFP攜帶小鼠中檢測到。關(guān)于骨骼肌萎縮，與MBT-2/CSi-GFP細(xì)胞相比，MBT-2/CSi-Hotair小鼠的腓腸肌肌纖維橫截面積明顯更厚（圖7g）。雖然從攜帶親本MBT-2或MBT-2/CSi-GFP腫瘤的小鼠獲得的肌肉組織表達(dá)升高的MuRF-1水平，但其表達(dá)在攜帶MBT-2/CSi-Hotair腫瘤的小鼠的肌肉組織中顯著降低（圖7h）?？傊?，這些結(jié)果表明順鉑治療可以誘導(dǎo)膀胱腫瘤小鼠的惡病質(zhì)。更重要的是，沉默膀胱腫瘤中Hotair表達(dá)可以改善順鉑誘導(dǎo)的小鼠惡病質(zhì)?？傊?，我們的動物研究提供了證據(jù)表明HOTAIR參與順鉑誘導(dǎo)的膀胱癌惡病質(zhì)。

圖7 敲低MBT-2膀胱荷瘤小鼠中的Hotair可減輕順鉑誘導(dǎo)的癌癥惡病質(zhì)

8. EGFR抑制劑厄洛替尼抑制腫瘤生長，但不能緩解順鉑誘導(dǎo)的膀胱腫瘤小鼠癌癥惡病質(zhì)

鑒于吉非替尼和厄洛替尼消除了順鉑誘導(dǎo)的膀胱癌細(xì)胞中促炎細(xì)胞因子的上調(diào)（圖4f，g，h），我們接下來詢問厄洛替尼治療是否可以恢復(fù)順鉑誘導(dǎo)的體內(nèi)惡病質(zhì)。MBT-2腫瘤模型中的治療方案如圖8a所示。健康小鼠和未接受順鉑或厄洛替尼的攜帶MBT-2小鼠之間的體重沒有顯著差異（圖8b）。然而，接受順鉑但不接受厄洛替尼治療的荷瘤小鼠與接受載體（PBS）的小鼠相比體重較低。值得注意的是，厄洛替尼治療并沒有改善用順鉑治療的荷瘤小鼠的體重減輕。此外，用順鉑治療的荷瘤小鼠的小腿圍減少，厄洛替尼治療無法恢復(fù)（圖8c）。關(guān)于腫瘤大小，順鉑和厄洛替尼聯(lián)合治療顯著減少了小鼠的腫瘤體積，而順鉑或厄洛替尼的單次治療對抑制腫瘤生長沒有影響（圖8d）?？傊c單次使用順鉑或厄洛替尼治療相比，厄洛替尼治療與順鉑聯(lián)合用于膀胱荷瘤小鼠顯著減小腫瘤大小。此外，我們的結(jié)果表明，順鉑治療誘導(dǎo)體重減輕，厄洛替尼對緩解膀胱腫瘤小鼠體重減輕和骨骼肌萎縮沒有影響。

圖8 厄洛替尼治療抑制腫瘤生長，但不能緩解MBT-2膀胱腫瘤小鼠順鉑誘導(dǎo)的癌癥惡病質(zhì)

結(jié)論：

該研究證明了HOTAIR在順鉑誘導(dǎo)的膀胱癌惡病質(zhì)中的關(guān)鍵作用，并將HOTAIR確定為膀胱癌和其他可能癌癥惡病質(zhì)的新治療靶點。盡管其他基因或信號通路參與順鉑誘導(dǎo)的膀胱癌惡病質(zhì)不容忽視，但EGFR-ProT-NF-κB-HOTAIR信號軸的組分代表了預(yù)防或改善順鉑誘導(dǎo)的膀胱癌和其他癌癥惡病質(zhì)的新治療策略的靶標(biāo)。

示意圖：

參與順鉑誘導(dǎo)的癌癥惡病質(zhì)的EGFR / ProT / NF-κB / HOTAIR軸的示意圖：

參考文獻(xiàn)：

Hu CY, Su BH, Lee YC, Wang CT, Yang ML, Shen WT, Fu JT, Chen SY, Huang WY, Ou CH, Tsai YS, Kuo FC, Shiau AL, Shieh GS, Wu CL. Interruption of the long non-coding RNA HOTAIR signaling axis ameliorates chemotherapy-induced cachexia in bladder cancer. J Biomed Sci. 2022 Dec 6;29(1):104. doi: 10.1186/s12929-022-00887-y.