大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞 RM

RM提取自出生后2天大鼠的大腦中，原代凍存，冰凍運(yùn)輸。每管細(xì)胞密度超過1x10^6/ml。細(xì)胞經(jīng)F4/80免疫熒光鑒定。本細(xì)胞經(jīng)檢測不含支原體,?細(xì)菌,?酵母菌和真菌。如采用ScienCell實(shí)驗(yàn)室特制的培養(yǎng)基，可保證此細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)，但由于該細(xì)胞不具備增殖能力，故不建議RM的擴(kuò)增或長期培養(yǎng)。

取新生SD大鼠若干只(出生24h內(nèi)),在無菌條件下斷頭,?迅速剪開顱骨,?取出腦組織至盛有冷PBS?液的培養(yǎng)皿中反復(fù)沖洗以去除血污;?再把全腦移入另一盛有PBS?液的培養(yǎng)皿中, 用小毛筆輕輕刷去腦表面的腦膜和血管,?用PBS液沖洗后剪去腦干僅留大腦半球;?用小剪刀充分剪碎腦組織,?加入比組織塊總量多30~50倍的0.05%?胰酶,?再移入50?mL?離心管, 用吸管反復(fù)吹打消化至肉眼觀察無明顯的腦組織團(tuán)塊;?加入DMEM/F12?完全培養(yǎng)基(含10%胎牛血清、100U/mL?青霉素和100?ug/mL?鏈霉素)?終止消化,? 再次反復(fù)吹打制成單細(xì)胞懸液,?配平,?1000?r/?min,?離心5min,?棄上清;?加定量完全培養(yǎng)液再次制成細(xì)胞懸液,?更具實(shí)驗(yàn)需要接種入若干個50?mL細(xì)胞培養(yǎng)瓶或者培養(yǎng)皿中, 置于5%CO2?恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱(?37度)?培養(yǎng);?3?h?后更換1?次培養(yǎng)液,?以后每3?d?換1?次液,?并在鏡下觀察細(xì)胞的生長和存活情況。細(xì)胞培養(yǎng)18?d~20d左右,?在倒置相差顯微鏡下可觀察到混和膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)物中出現(xiàn)細(xì)胞分層現(xiàn)象,?即底層為扁平、多種形狀的、具有多個突起的大細(xì)胞(星型膠質(zhì)細(xì)胞)?, 而上層細(xì)胞明顯偏小呈類圓形、折光性強(qiáng),?附著于星型膠質(zhì)細(xì)胞表面生長(小膠質(zhì)細(xì)胞)?;