m6A單堿基PCR檢測技術(shù)服務(wù)

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m6A單堿基PCR檢測技術(shù)服務(wù)

目前RNA甲基化檢測一般依賴(lài)于m6A特異性抗體,但這種方法通常只能對高甲基化區域進(jìn)行鑒定,不能精確到單個(gè)位點(diǎn)的m6A檢測。
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m6A單堿基PCR檢測技術(shù)服務(wù)

目前RNA甲基化檢測一般依賴(lài)于m6A特異性抗體,但這種方法通常只能對高甲基化區域進(jìn)行鑒定,不能精確到單個(gè)位點(diǎn)的m6A檢測。SELECT–m6A PCR——single-base elongation-and ligation-based qPCR amplification method,即單堿基延長(cháng)和連接的 qPCR 擴增技術(shù),能夠實(shí)現低豐度轉錄本中 m6A 單堿基分辨率的檢測。原理如下圖所示:

1. SELECT 技術(shù)原理圖

該方法簡(jiǎn)單快捷,用時(shí)只需三小時(shí),能夠實(shí)現低豐度轉錄本中 m6A 單堿基分辨率的檢測。該方法基于 m6A 修飾的兩點(diǎn)特性:(i)能夠阻礙 DNA 聚合酶在反轉錄過(guò)程的單堿基延伸;(ii)能夠降低缺口連接酶的連接效率。SELECT 方法采用熒光定量 PCR 的方法進(jìn)行定量。

 技術(shù)優(yōu)勢

1. 熒光定量 PCR 進(jìn)行精確定量,達到單堿基分辨率

2. 無(wú)需抗體 IP,無(wú)需同位素標記,降低成本,可操作性高

3. 靈敏度高,總 RNA 所需樣本低至 1μg 

技術(shù)服務(wù)送樣要求

1. RNA,≥1μg / 樣本;

2. 細胞,≥2.5×105 個(gè)細胞 / 樣本

 

參考文獻:

Xiao, Y., Wang, Y., Tang, Q., Wei, L., Zhang, X., & Jia, G. (2018). An Elongation- and Ligation-Based qPCR Amplification Method for the Radiolabeling-Free Detection of Locus-Specific N6 -Methyladenosine Modification. Angewandte Chemie (International ed. in English), 57(49), 15995–16000.

Wang Y, Xiao Y, Dong S, Yu Q, Jia G. Antibody-free enzyme-assisted chemical approach for detection of N6-methyladenosine. Nat Chem Biol. 2020;16(8):896-903. doi:10.1038/s41589-020-0525-x

Xu W, Li J, He C, et al. METTL3 regulates heterochromatin in mouse embryonic stem cells. Nature. 2021;591(7849):317-321.


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