外泌體microRNA定量PCR 實驗
外泌體microRNA定量PCR 實驗 外泌體(Exosome)是由細胞分泌而來的微小囊泡，直徑約為30-100 nm，具有杯狀形態(tài)、雙層膜結(jié)構(gòu)，天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和細胞培養(yǎng)基等生物體液中。包括腫瘤細胞在內(nèi)幾乎所有類型的細胞（免疫細胞、神經(jīng)細胞、干細胞)，都可以產(chǎn)生并釋放exosome。Exosome可通過細胞膜受體直接激活受體細胞，也可運輸?shù)鞍踪|(zhì)、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA，甚至細胞器進入受體細胞，參與細胞間通訊。Exosome在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)、血管生成、凋亡、凝血和廢物處理等生理過程發(fā)揮關(guān)鍵作用，可作為多種疾病的早期診斷標記物，也能作為靶向藥物的載體進行疾病治療。miRNA是一類22nt左右大小的非編碼分子， 它可以通過外泌體從一個地方轉(zhuǎn)運到另外一個地方行使基因沉默功能。通過檢測外泌體中miRNA表達變化，可以發(fā)現(xiàn)外泌體中miRNA特異性功能。  圖1外泌體產(chǎn)生過程的示意圖   圖2外泌體miRN PCR擴增曲線 圖3外泌體miRN PCR溶解曲線 實驗流程：
樣品要求 血清樣品：2-4ml 外泌體樣品：1ml RNA樣品：500ng 參考文獻 Tkach M, et al. Communication by Extracellular Vesicles: Where We Are and Where We Need to Go. Cell. 2016 Mar 10;164(6):1226-32 Enderle D, Spiel A, Coticchia CM, Berghoff E, Mueller R, Schlumpberger M, et al.Characterization of RNA from Exosomes and Other Extracellular Vesicles Isolated by a Novel Spin Column-Based Method. PLoS ONE(2015)10(8): e0136133. doi:10.1371/journal.pone.0136133 Zhou W, Fong M Y, Min Y, et al. Cancer-Secreted miR-105 Destroys Vascular Endothelial Barriers to Promote Metastasis[J]. Cancer cell. 2014, 25(4): 501-515. Takahashi KJ, Yan IK, Wood J, et al. Involvement of Extracellular Vesicle Long Noncoding RNA (linc-VLDLR) in Tumor Cell Responses to Chemotherapy. Mol Cancer Res.2014 ,12(10): 1377–87. Li Y, Zheng QP, Bao CY, et al. Circular RNA is enriched and stable in exosomes: a promising biomarker for cancer diagnosis. Cell Res. 2015, 25(8):981-4. Melo SA, Sugimoto H, O'Connell JT, et al. Cancer Exosomes Perform Cell-Independent MicroRNA Biogenesis and Promote Tumorigenesis. Cancer Cell, 2014. |
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