外泌體及內(nèi)容物的可視化——基于全內(nèi)部反射熒光的單囊泡成像測(cè)定技術(shù)

 外泌體（exosome）是一類由細(xì)胞分泌的30-150nm的小囊泡，exo在離開“母體細(xì)胞”時(shí)將帶走細(xì)胞內(nèi)的部分蛋白質(zhì)和復(fù)雜RNA，經(jīng)膜融合釋放到胞外基質(zhì)中，去到它想去的地方。這使得exo從默默無聞的小龍?zhí)壮蔀檠芯考?xì)胞間對(duì)話（cross-talk）的大熱主角之一。
目前常用的的研究手段如q-PCR雖然可以對(duì)exo內(nèi)含物的含量進(jìn)行研究，但并不能在單囊泡水平對(duì)內(nèi)含物進(jìn)行原位化學(xué)計(jì)量，也就是說無法揭示單囊泡水平的表型異質(zhì)性。今天小編給大家?guī)淼氖且豁?xiàng)能進(jìn)行原位化學(xué)計(jì)量的技術(shù)：基于全內(nèi)部反射熒光（TIRF）的單囊泡成像測(cè)定技術(shù)。
我們先來看一下該技術(shù)在研究腫瘤血漿exo中的應(yīng)用：

首先，我們用CD63探針捕獲血漿中的exo，將exo固定在蓋玻片上；緊接著，加入可激活的適體探針（AAP）來檢測(cè)靶向含有PTK7的exo，當(dāng)遇到PTK7-exo時(shí)，APP被激活，發(fā)出熒光。這是DNA納米裝置（ABDNs）放大熒光信號(hào)，在TIRF成像系統(tǒng)下檢測(cè)生成的ABDN即可用于定量分析。這一技術(shù)甚至可以直接觀察和量化微量血漿樣品（1μl）中的exo。
接下來，我們?cè)賮砜匆幌氯绾斡眠@一技術(shù)直接測(cè)定血清中外泌體內(nèi)的microRNAs：首先，確定要研究的microRNA，設(shè)計(jì)與靶miRNA特異結(jié)合的DNA酶探針，用0.2 U mL -1 SLO通過可逆透化方法將DNA探針遞送到exo中，當(dāng)探針與靶miRNA特異結(jié)合時(shí)激發(fā)熒光，通過TIRF成像系統(tǒng)下檢測(cè)熒光數(shù)和密度即可。

小編相信，隨著各種技術(shù)的不斷發(fā)展和成熟，人們對(duì)于exo的研究將更加深入和透徹。畢竟“科學(xué)技術(shù)是第一生產(chǎn)力”嘛！