是什么在保護(hù)你的肝臟不受酒精的毒害？是補(bǔ)體C3激活Gly-tRFs的結(jié)果

摘要：
我們已知補(bǔ)體在酒精性脂肪肝?。ˋFLD）中發(fā)揮重要作用，但其基本機(jī)制卻知之甚少，從而限制了補(bǔ)體系統(tǒng)治療干預(yù)的合理方法的發(fā)展。2019年5月10日廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院在Cell Research上發(fā)表了論文，他們發(fā)現(xiàn)C3缺乏對(duì)乙醇誘導(dǎo)的肝臟脂肪變性和炎癥具有保護(hù)作用，還證明了用C3激活的特異性抑制劑CR2-Crry治療對(duì)野生型小鼠的保護(hù)作用。甘氨酸轉(zhuǎn)移tRNA衍生片段（Gly-tRFs）的表達(dá)在乙醇喂養(yǎng)的小鼠中上調(diào)，并且慢性乙醇喂養(yǎng)誘導(dǎo)的肝脂肪變性小鼠體內(nèi)Gly-tRF的抑制作用降低而不影響炎癥。 Gly-tRF的表達(dá)在C3缺乏或CR2-Crry處理的小鼠中下調(diào)，在C5缺陷小鼠中不表達(dá)，通過調(diào)節(jié)CYP2E1，C3活化產(chǎn)物C3a或Asp（C3a-des-Arg）恢復(fù)Gly-tRF表達(dá)。肝組織的轉(zhuǎn)錄組分析顯示Gly-tRF抑制劑上調(diào)sirtuin1（Sirt1）的表達(dá)，并隨后影響下游脂肪生成和β-氧化途徑。相似地，Gly-tRF與AGO3通過3'UTR中的序列互補(bǔ)性相互作用以下調(diào)Sirt1表達(dá)。值得注意的是，與健康對(duì)照相比，在AFLD患者中，C3d，CYP2E1和Gly-tRF的表達(dá)水平上調(diào)，而Sirt1降低?？偟膩碚f，我們的研究結(jié)果表明，C3激活產(chǎn)物通過調(diào)節(jié)Gly-tRF的表達(dá)促成肝細(xì)胞增多癥。 C3活化步驟的補(bǔ)體抑制和Gly-tRF抑制劑治療可能是AFLD的潛在和精確的治療方法。
技術(shù)路線：

研究結(jié)果：
1、乙醇注射小鼠后，檢測對(duì)照組和C3缺乏組，CR2-Crry組血清中C3a的含量，ALT，AST，TNF-α和IL-6的表達(dá)水平，HE染色檢驗(yàn)各組細(xì)胞的狀況以及Ly6G，IL-1β，CXC14和ICAM1的mRNA水平。得出結(jié)論：靶向補(bǔ)體抑制劑CR2-Crry或C3缺乏對(duì)乙醇誘導(dǎo)的肝臟脂肪變性和肝損傷具有治療作用。

2、檢測肝臟IRI在用PBS處理的或PBS-乙醇配對(duì)喂養(yǎng)的小鼠中CR2-Crry治療后血清中ALT，AST，C3a，TNF-α和IL-6的表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CR2-Crry治療可預(yù)防AFLD（酒精性脂肪肝）小鼠的IRI（ischemia-reperfusion Injury，缺血-再灌注損傷）（Fig. 2）。

3、補(bǔ)體C3通過調(diào)節(jié)AFLD小鼠中的CYP2E1表達(dá)而促成乙醇誘導(dǎo)的脂肪變性（Fig. 3）通過蛋白質(zhì)印跡檢測CR2-Crry處理的或C3 - / - 小鼠中CYP2E1的表達(dá)，CYP2E1活性。并檢測了肝臟樣本中的MDA，GSH和SOD水平。C3 - / -小鼠施用肽C3a（pC3a）或Asp（pAsp），后通過蛋白質(zhì)印跡檢測CYP2E1的表達(dá)。此外，用f AAV9-shRNA敲低C5aR2，檢測敲低C5aR2對(duì)CYP2E1表達(dá)沒有影響。然后將C5aR2與β-抑制蛋白2的共免疫沉淀，并用Arb2 siRNA轉(zhuǎn)染AML12細(xì)胞，12小時(shí)后用100mM乙醇處理，通過蛋白質(zhì)印跡檢測CYP2E1表達(dá)，發(fā)現(xiàn)沒有影響。得出結(jié)論是C3而不是C5對(duì)CYP2E1的調(diào)節(jié)起作用。

4、實(shí)驗(yàn)證明是C3而不是C5調(diào)節(jié)脂肪變性的AFLD小鼠體內(nèi)Gly-tRF表達(dá)（Fig. 4）

5、Gly-tRF參與AFLD小鼠中脂質(zhì)代謝途徑的調(diào)節(jié)（Fig. 5）

6、將實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)移到人體中，研究了在AFLD患者和健康對(duì)照的肝組織中C3d，CYP2E1，Gly-tRF和Sirt1的表達(dá)，結(jié)果與小鼠中得出的結(jié)論一致。闡明了C3調(diào)節(jié)肝臟脂肪變性和炎癥的分子機(jī)制。 C3a和Asp均通過介導(dǎo)CYP2E1的表達(dá)
促進(jìn)Gly-tRFs的表達(dá)，CYP2E1通過調(diào)節(jié)Sirt1表達(dá)促進(jìn)肝臟脂肪變性的發(fā)展

參考文獻(xiàn)：
Zhong Fudi., Hu Zhigao., Jiang Keqing., et al., (2019). Complement C3 activation regulates the production of tRNA-derived fragments Gly-tRFs and promotes alcohol-induced liver injury and steatosis., Cell Res., 29, 548-561.  IF：17.848