M6A介導(dǎo)的lncRNA 在肝癌中研究進(jìn)展

    lncRNA參與多樣化生物過程，協(xié)調(diào)細(xì)胞分化，發(fā)育和發(fā)病機(jī)理。lncRNAs失調(diào)在癌癥進(jìn)展中起重要作用，lncRNA的m6A修飾會給它在癌癥中的功能效應(yīng)帶來何種影響，這篇Journal of Hematology & Oncology文章告訴你答案。

思維路線：

結(jié)果：
1. LINC00958在HCC中高表達(dá)，可預(yù)測總生存率
    肝癌中LINC00958的表達(dá)明顯升高，尤其是在那些分化中等或較差、微血管侵襲和TNM III /IV期的人中，LINC00958表達(dá)高的患者總體生存率較低，回歸分析表明LINC00958是肝癌患者的獨(dú)立預(yù)后因素。

2.肝癌細(xì)胞的惡性行為需要LINC00958
    LINC00958主要位于細(xì)胞質(zhì)中，LINC00958的敲低能降低HCCLM3和Focus細(xì)胞的增殖能力，遷移侵襲能力明顯減少，過表達(dá)促進(jìn)肝細(xì)胞的遷移侵襲能力。這些表明LINC00958在體外促進(jìn)HCC的增殖和遷移。

3.在肝癌中LINC00958靶向miR-3619-5p以發(fā)揮促腫瘤作用
    數(shù)據(jù)庫分析發(fā)現(xiàn)六個miRNA與LINC00958具有潛在的互補(bǔ)結(jié)合序列，LINC00958-過表達(dá)組中miR-3619-5p富集最高，LINC00958在miR-3619 mimics組中的富集度高于對照組。這些表明LINC00958和miR-3619-5p存在于同一RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物中。miR-3619-5p模擬物降低轉(zhuǎn)染野生型LINC00958序列的HCC細(xì)胞的螢光素酶活性，轉(zhuǎn)染生物素標(biāo)記miR-3619-5pHCC細(xì)胞中LINC00958增，加HCC細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中有LINC00958和miR-3619-5p的共定位。

4. HDGF是miR-3619-5p的直接靶標(biāo)，對于LINC00958的功能至關(guān)重要
    生物信息學(xué)分析miR-3619-5p的靶基因，只有肝細(xì)胞源性生長因子（HDGF）在LINC00958敲低細(xì)胞中下調(diào)，并在LINC00958過表達(dá)細(xì)胞中上調(diào)。LINC00958沉默的HCC細(xì)胞中進(jìn)行RNA測序，發(fā)現(xiàn)429個基因下調(diào)和134個基因上調(diào)，HDGF下調(diào)顯著，螢光素酶報告基因?qū)嶒?yàn)表明miR-3619-5p模擬物降低了野生型HDGF 3'-UTR螢光素酶的活性，在HCCLM3細(xì)胞中，miR-3619-5p模擬物導(dǎo)致HDGF表達(dá)水平降低，加入miR-3619-5p抑制劑時HDGF表達(dá)水平高。HDGF在肝癌組織中顯著上調(diào)，HCC組織標(biāo)本中miR-3619-5p和HDGF表達(dá)水平存在負(fù)相關(guān)，LINC00958的表達(dá)與HDGF表達(dá)正相關(guān)，HDGF過表達(dá)可以挽救被sh-LINC00958抑制的細(xì)胞增殖。這些表明HCC中LINC00958 / miR-3619-5p / HDGF軸的促腫瘤作用。

5. LINC00958與肝癌細(xì)胞的脂肪生成呈正相關(guān)
    細(xì)胞敲低LINC00958表現(xiàn)出降低的膽固醇和甘油三酸酯水平，過表達(dá)LINC00958膽固醇和甘油三酸酯水平較高。LINC00958敲低細(xì)胞中脂肪形成中的幾種關(guān)鍵酶的mRNA水平下降包括SREBP1，F(xiàn)ASN，SCD1和ACC1，過表達(dá)正好相反。在HCC細(xì)胞中進(jìn)行了油紅O染色，LINC00958敲低降低了HCCLM3細(xì)胞脂滴的數(shù)量，LINC00958高水平肝癌患者樣本中檢測到更多的脂滴。

6. LINC00958促進(jìn)體內(nèi)HCC生長
    LINC00958敲低抑制腫瘤，過表達(dá)加速腫瘤生長。HDGF的表達(dá)水平在sh-LINC00958組中下調(diào)，并在LINC00958過表達(dá)組中上調(diào)。在sh-LINC00958腫瘤組織中檢測到HDGF，SERBP1和Ki67表達(dá)水平下調(diào)，在LINC00958組中上調(diào)。

7. m6A修飾與HCC細(xì)胞的LINC00958上調(diào)相關(guān)
    HCC細(xì)胞的LINC00958中m6A高度富集，HCC組織METTL3表達(dá)水平與LINC00958的水平正相關(guān)。在METTL3沉默的HCC細(xì)胞中LINC00958的m6A水平較低，METTL3下調(diào)與LINC00958表達(dá)水平降低有關(guān)actinomycin D處理HCC細(xì)胞可阻止轉(zhuǎn)錄，發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)METTL3的沉默降低LINC00958在細(xì)胞中的半衰期。這些表明METTL3介導(dǎo)m6A與LINC00958的上調(diào)有關(guān)，可能是通過調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)錄本的穩(wěn)定性來實(shí)現(xiàn)的。DNA甲基化和組蛋白修飾不影響肝癌中的LINC00958。

8. PLGA-PEG(si-LINC00958) NPs在HCC PDX模型中的表征及治療效果
    研究LINC00958作為HCC治療劑的潛在用途，開發(fā)基于PLGA的新型納米平臺封裝si-LINC00958，稱為PLGA-PEG（si-LINC00958）NP。PLGAPEG（si-LINC00958）NP呈球形，并尺寸分布窄，平均直徑為170.49±4.45 nm。Courmarin-6標(biāo)記的NP與細(xì)胞孵育，顯示強(qiáng)熒光信號，表明NP增加了細(xì)胞對藥物的吸收。小鼠通過尾靜脈注射PLGA-PEG（si-LINC00958）NP，腫瘤生長受到明顯抑制。異種移植鼠敲低LINC00958，SREBP1和HDGF的表達(dá)水平下調(diào)。生存分析表明PLGA-PEG（si-LINC00958）NP的全身給藥延長了小鼠的總生存期。評估PLGA-PEG（si-LINC00958）NP的全身毒性，靜脈注射PLGAPEG（si-LINC00958）NPs后小鼠主要器官包括肝，腎，肺，脾，和心臟無明顯毒性，沒有明顯的肝毒性和腎毒性。