miRNA介導(dǎo)胰腺癌化學(xué)耐藥性

欄目:最新研究動(dòng)態(tài) 發(fā)布時(shí)間:2020-06-30
胰腺導(dǎo)管腺癌(PDAC)作為最致命的胃腸道惡性腫瘤,是癌死亡的第四大原因...

    胰腺導(dǎo)管腺癌(PDAC)作為最致命的胃腸道惡性腫瘤,是癌死亡的第四大原因?;诩魉麨I(GEM)的化療方案是癌癥治療的重要組成部分,但化療抵抗是PDAC治療的主要挑戰(zhàn)。癌癥中miRNA表達(dá)失調(diào)可能是導(dǎo)致改變生物過(guò)程的關(guān)鍵因素,包括化學(xué)抗性。今日,小編分享給大家一篇關(guān)于PDAC化學(xué)耐藥性研究的文章。
技術(shù)路線:

結(jié) 果:
1. 耐GEM的PDAC細(xì)胞中MiR-146a-5p異常下調(diào),并與PDAC患者預(yù)后不良相關(guān)
    培養(yǎng)GEM抗性的PDAC細(xì)胞系(MiaPaCa-2-GR和SW1990-GR細(xì)胞),miRNA微陣列用于分析MiaPaCa-2-GR細(xì)胞與它們親代細(xì)胞之間同時(shí)上調(diào)或下調(diào)的miRNA,結(jié)合數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)現(xiàn)miR-146a-5p在所有PDAC-GR細(xì)胞系中均下調(diào),比親代細(xì)胞表達(dá)低,表明miR-146a-5p在調(diào)節(jié)化學(xué)抗性中有潛在作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)miR-146a-5p在PDAC腫瘤中低表達(dá),且其表達(dá)與臨床病理特征無(wú)顯著關(guān)系,miR-146a-5p的下調(diào)與更短的預(yù)后相關(guān)。

2. MiR-146a-5p抑制PDAC細(xì)胞增殖和化學(xué)耐藥性
    miR-146a-5p的過(guò)表達(dá)顯著抑制PDAC細(xì)胞的增殖和集落形成能力。用各種濃度的GEM處理PANC-1和SW1990細(xì)胞持續(xù)48小時(shí),發(fā)現(xiàn)GEM的IC50值在轉(zhuǎn)染miR-146a-5p模擬物的PDAC細(xì)胞中顯著降低,表明miR-146a-5p增強(qiáng)GEM的細(xì)胞毒性。抑制miR-146a-5p表達(dá)有相反效果。誘導(dǎo)凋亡是GEM抗腫瘤作用的關(guān)鍵機(jī)制,發(fā)現(xiàn)GEM誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡比率在轉(zhuǎn)染miR-146a-5p-mimic的細(xì)胞中增加,而miR-146a-5p的下調(diào)抑制GEM處理導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡。這些結(jié)果表明miR-146a-5p不僅抑制細(xì)胞增殖,而且增強(qiáng)GEM的細(xì)胞毒性。

3. MiR-146a-5p可敏化胰腺異種移植腫瘤的化療療效
    建立PDAC異種移植模型,當(dāng)移植小鼠出現(xiàn)明顯的異種移植腫瘤,每周兩次用miR-146a-5p和GEM治療。miR-146a-5p agomir處理的異種移植腫瘤組織中miR-146a-5p的表達(dá)水平升高,腫瘤大小和重量顯著降低,GEM治療后進(jìn)一步減少。miR-146a-5p agomir和GEM治療細(xì)胞增殖受到抑制,細(xì)胞凋亡明顯增加。這些結(jié)果表明,miR-146a-5p可以抑制腫瘤生長(zhǎng)并使PDAC細(xì)胞對(duì)GEM治療敏感。

4. MiR-146a-5p靶向TRAF6的3'-UTR并抑制其表達(dá)
    通過(guò)各種數(shù)據(jù)庫(kù)確定TRAF為miR-146a-5p的潛在靶標(biāo),miR-146a-5p模擬物處理的細(xì)胞TRAF6表達(dá)減少,在miR-146a-5p抑制劑處理的細(xì)胞中增加。螢光素酶實(shí)驗(yàn)確認(rèn)miR-146a-5p可直接與TRAF6結(jié)合并抑制其表達(dá)。在36對(duì)PDAC腫瘤和鄰近的正常組織中檢查TRAF6的表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)RAF6在PDAC組織中的表達(dá)明顯更高。IHC染色顯示TRAF6蛋白在PDAC組織中表達(dá)增加,并與更多的陽(yáng)性淋巴結(jié)、分化差、更嚴(yán)重TNM期相關(guān)。TRAF6的增加表達(dá)與預(yù)后較差密切相關(guān)。

5. TRAF6介導(dǎo)miR-146a-5p對(duì)PDAC細(xì)胞的GEM抗性
    在PDAC細(xì)胞中敲低或過(guò)表達(dá)TRAF6,發(fā)現(xiàn)沉默TRAF6降低了GEM的IC50值,并提高在PDAC細(xì)胞中的細(xì)胞毒性作用,而TRAF6過(guò)表達(dá)會(huì)增加IC50值,GEM誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡在RAF6-敲低細(xì)胞中增加。miR-146a-5p模擬物誘導(dǎo)的較低的IC50可被之后的TRAF6過(guò)表達(dá)所逆轉(zhuǎn),miR-146a-5p抑制劑處理的細(xì)胞的高IC50值在過(guò)表達(dá)TRAF6時(shí)進(jìn)一步增加,表明miR-146a-5p 對(duì)GEM的作用能被TRAF6 過(guò)表達(dá)抑制。這些結(jié)果表明miR-146a-5p通過(guò)直接調(diào)控TRAF6可使PDAC細(xì)胞對(duì)GEM的化學(xué)功效敏感。

6. MiR-146a-5p通過(guò)TRAF6 /NF-κB p65 / P-gp軸負(fù)調(diào)節(jié)GEM抗性
    NF-κB p65、P-gp與耐藥相關(guān),TRAF6可作為NF-κB的分子橋和關(guān)鍵激活劑。研究發(fā)現(xiàn)miR-146a-5p過(guò)表達(dá)降低了NF-κB p65和P-gp表達(dá)水平,而這些蛋白質(zhì)的水平在miR-146a-5p抑制后明顯增加。同樣,TRAF6敲低降低NF-κB p65和P-gp的表達(dá)水平。miR-146a-5p agomir處理的異種移植腫瘤中TRAF6,NF-κBp 65和P -gp的表達(dá)水平降低,數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)TRAF6表達(dá)與NF-κBp 65(RELA)和P-gp(ABCB1)的表達(dá)呈正相關(guān)。這些結(jié)果表明miR-146a-5p通過(guò)TRAF6 /NF-κB p65/ P-gp軸調(diào)節(jié)PDAC細(xì)胞的GEM抗性。

總 結(jié):
    1. MiR-146a-5p可抑制PDAC細(xì)胞增殖和化學(xué)耐藥性;
    2. miR-146a-5p通過(guò)TRAF6 /NF-κB p65/ P-gp軸調(diào)節(jié)PDAC細(xì)胞的GEM抗性。