免疫治療近年來受到廣泛關注,免疫檢查點在免疫治療中扮演著關鍵角色,PD-1/PD-L1是免疫檢查點的重要組成部分。研究表明,從癌癥患者的血液樣品中分離出細胞外囊泡PD-L1表達可與腫瘤特征相關。今天我們講一篇關于黑色素瘤患者血漿中分離出的外泌體中PD-L1水平是否可以預測患者對免疫療法的反應的臨床研究論文,題名為:Tracking the evolution of circulating exosomal-PD-L1 to monitor melanoma patients。發(fā)表在Journal of Extracellular Vesicles期刊,影響因子14.976。
文中從不同的細胞系中純化了外泌體,例如人和鼠類黑色素瘤(SK-MEL-2,B16F10),人肺癌(A549和MRC-5)。WB檢測外泌體的標志物TSG101,Alix,CD9和CD63,Grp94用作陰性對照。PD-L1在三個癌細胞系外泌體中表達,不在非癌性細胞系中表達。隨后分析了健康供體中分離出的外泌體(n=5),黑色素瘤患者(n=6)和肺癌患者(n=6)的合并血樣中分離出的外泌體中PD-L1的表達。僅在分離自癌癥患者的外泌體中檢測到PD-L1。
為了確定PD-L1是否在囊膜上表達,使用了干擾生物層方法來捕獲帶有PD-L1重組蛋白的外泌體。結(jié)果表明,PD-L1存在于腫瘤來源的外泌體膜上。將PD-L1外泌體與原代T細胞共培養(yǎng),通過檢測PD-1,Ki67和IFNγ的表達確定,外泌體在抑制T細胞活化方面與癌細胞一樣有效。這些結(jié)果表明PD-L1在衍生自癌細胞的外泌體中分泌,并且該分子是有功能的,因為它能夠介導T細胞免疫抑制。
為了研究ExoPD-L1作為潛在的生物標志物,開展了一項臨床研究。納入了100名黑色素瘤患者。在這些患者中,43%接受了抗PD-1抗體,10%的接受ipilimumab和18%接受BRAF和MEK抑制劑治療。
首先,比較了血液樣本中外泌體PD-L1表達與組織中PD-L1腫瘤的表達。在血漿樣品中,通過ELISA比較可溶性PD-L1和外泌體中PD-L1的表達水平。外泌體中PD-L1表達顯著高于血漿中PD-L1。在所有患者中均檢測到ExoPD-L1表達。而在腫瘤活檢中只有67%的PD-L1陽性。我們得出的結(jié)論是,PD-L1在循環(huán)外泌體中比在活檢中或溶于血漿時更容易檢測和定量。
評估了ExoPD-L1表達的變化是否可以預測腫瘤對治療的反應。從46例患者中獲得了治療前后的兩個血液樣本(S1 + S2)。S1和S2之間的中位間隔為4.5個月。S2樣本不可用的原因是患者死亡(n = 23)或患者失去隨訪(n = 31)。在這46例患者中,有36例接受了抗PD-1治療。其他患者接受了伊匹木單抗(n = 2),抗BRAF和抗MEK靶向治療(n =8)。腫瘤進展的患者中ExoPD-L1顯著增加,并且ExoPD-L1與疾病狀態(tài)顯著相關。使用ROC曲線分析, ExoPD-L1可以很好地區(qū)分患者的疾病狀態(tài)。
最后,通過測量ExoPD-L1水平的變化探索了追蹤疾病發(fā)展的可能性。對血液樣本中的ExoPD-L1進行了定量,圖像掃描中檢測到的腫瘤反應與循環(huán)中ExoPD-L1的水平降低相關。抗PD-1治療后,ExoPD-L1水平與對治療反應之間的這種負相關。
ExoPD-L1的水平與對治療的反應呈負相關:成像掃描分析確定ExoPD-L1的增加與腫瘤進展有關,而減少與腫瘤消退有關。PD-L1的循環(huán)率可能反映了由不同療法引起的涉及CD8 + T細胞的抗腫瘤免疫力。