追蹤循環(huán)體外泌體PD-L1的演變以監(jiān)測黑色素瘤患者

    免疫治療近年來受到廣泛關(guān)注，免疫檢查點在免疫治療中扮演著關(guān)鍵角色，PD-1/PD-L1是免疫檢查點的重要組成部分。研究表明，從癌癥患者的血液樣品中分離出細胞外囊泡PD-L1表達可與腫瘤特征相關(guān)。今天我們講一篇關(guān)于黑色素瘤患者血漿中分離出的外泌體中PD-L1水平是否可以預(yù)測患者對免疫療法的反應(yīng)的臨床研究論文，題名為：Tracking the evolution of circulating exosomal-PD-L1 to monitor melanoma patients。發(fā)表在Journal of Extracellular Vesicles期刊，影響因子14.976。
    文中從不同的細胞系中純化了外泌體，例如人和鼠類黑色素瘤（SK-MEL-2，B16F10），人肺癌（A549和MRC-5）。WB檢測外泌體的標志物TSG101，Alix，CD9和CD63，Grp94用作陰性對照。PD-L1在三個癌細胞系外泌體中表達，不在非癌性細胞系中表達。隨后分析了健康供體中分離出的外泌體（n=5），黑色素瘤患者（n=6）和肺癌患者（n=6）的合并血樣中分離出的外泌體中PD-L1的表達。僅在分離自癌癥患者的外泌體中檢測到PD-L1。

    為了確定PD-L1是否在囊膜上表達，使用了干擾生物層方法來捕獲帶有PD-L1重組蛋白的外泌體。結(jié)果表明，PD-L1存在于腫瘤來源的外泌體膜上。將PD-L1外泌體與原代T細胞共培養(yǎng)，通過檢測PD-1，Ki67和IFNγ的表達確定，外泌體在抑制T細胞活化方面與癌細胞一樣有效。這些結(jié)果表明PD-L1在衍生自癌細胞的外泌體中分泌，并且該分子是有功能的，因為它能夠介導(dǎo)T細胞免疫抑制。
    為了研究ExoPD-L1作為潛在的生物標志物，開展了一項臨床研究。納入了100名黑色素瘤患者。在這些患者中，43％接受了抗PD-1抗體，10％的接受ipilimumab和18％接受BRAF和MEK抑制劑治療。
    首先，比較了血液樣本中外泌體PD-L1表達與組織中PD-L1腫瘤的表達。在血漿樣品中，通過ELISA比較可溶性PD-L1和外泌體中PD-L1的表達水平。外泌體中PD-L1表達顯著高于血漿中PD-L1。在所有患者中均檢測到ExoPD-L1表達。而在腫瘤活檢中只有67％的PD-L1陽性。我們得出的結(jié)論是，PD-L1在循環(huán)外泌體中比在活檢中或溶于血漿時更容易檢測和定量。

    評估了ExoPD-L1表達的變化是否可以預(yù)測腫瘤對治療的反應(yīng)。從46例患者中獲得了治療前后的兩個血液樣本（S1 + S2）。S1和S2之間的中位間隔為4.5個月。S2樣本不可用的原因是患者死亡（n = 23）或患者失去隨訪（n = 31）。在這46例患者中，有36例接受了抗PD-1治療。其他患者接受了伊匹木單抗（n = 2），抗BRAF和抗MEK靶向治療（n =8）。腫瘤進展的患者中ExoPD-L1顯著增加，并且ExoPD-L1與疾病狀態(tài)顯著相關(guān)。使用ROC曲線分析， ExoPD-L1可以很好地區(qū)分患者的疾病狀態(tài)。

    最后，通過測量ExoPD-L1水平的變化探索了追蹤疾病發(fā)展的可能性。對血液樣本中的ExoPD-L1進行了定量，圖像掃描中檢測到的腫瘤反應(yīng)與循環(huán)中ExoPD-L1的水平降低相關(guān)。抗PD-1治療后，ExoPD-L1水平與對治療反應(yīng)之間的這種負相關(guān)。

    ExoPD-L1的水平與對治療的反應(yīng)呈負相關(guān)：成像掃描分析確定ExoPD-L1的增加與腫瘤進展有關(guān)，而減少與腫瘤消退有關(guān)。PD-L1的循環(huán)率可能反映了由不同療法引起的涉及CD8 + T細胞的抗腫瘤免疫力。