IGF2BP2通過充當(dāng)m6A閱讀器來調(diào)節(jié)DANCR

    RNA m6A甲基化修飾哺乳動物RNA最主要的化學(xué)修飾方式，修飾大約60%的RNA，目前發(fā)現(xiàn)microRNA，circRNA, rRNA, tRNA和snoRNA上都有發(fā)生m6A修飾。研究發(fā)現(xiàn)m6A在腫瘤發(fā)生發(fā)展和耐藥中發(fā)揮重要作用。今天我們講一篇關(guān)于IGF2BP2是否可以通過m6A修飾lncRNA的表達(dá)，導(dǎo)致胰腺癌中癌癥干細(xì)胞（CSC）的自我更新的文章。文章題名為：IGF2BP2 regulates DANCR by serving as an N6-methyladenosine reader，發(fā)表于cell death and differentiation期刊，影響因子10.717。

    IHC染色確定了IGF2BP2在胰腺癌組織中高表達(dá)，并且顯著降低患者生存期。cBioPortal數(shù)據(jù)庫顯示，高水平的IGF2BP2與不良的總生存率（OS）顯著相關(guān)，與Kaplan–Meier數(shù)據(jù)庫分析結(jié)果一致。這些結(jié)果突出了IGF2BP2在胰腺癌中的臨床意義。

    在BXPC-3和SW1990細(xì)胞中過表達(dá)IGF2BP2，發(fā)現(xiàn)IGF2BP2促進(jìn)了細(xì)胞增殖。相比之下，IGF2BP2敲低減少了BXPC-3細(xì)胞的增殖。在BXPC-3細(xì)胞中敲除了IGF2BP2，IGF2BP2 KO導(dǎo)致細(xì)胞增殖顯著降低。在IGF2BP2敲除細(xì)胞中過表達(dá)IGF2BP2重新表達(dá)恢復(fù)了細(xì)胞增殖能力。并且IGF2BP2 KO導(dǎo)致與干性相關(guān)的基因下調(diào)。

    IGF2BP2敲低細(xì)胞中使用RT-PCR lncRNA profiler進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)與對照相比，幾個lncRNA表達(dá)被調(diào)控。包括DANCR，在IGF2BP2敲低細(xì)胞中降低了約40％。IGF2BP2過表達(dá)上調(diào)DANCR，IGF2BP2 KO抑制了DANCR表達(dá)。由于DANCR可以促進(jìn)癌癥干性，所以DANCR作為下一部研究對象。在BXPC-3和SW1990細(xì)胞中過表達(dá)DANCR。CCK8分析表明DANCR的過表達(dá)促進(jìn)了細(xì)胞增殖并增加了腫瘤成球能力。qRT-PCR檢測到，干性相關(guān)的基因（OCT4，NANOG，BMI1，CD24和CD133）在DANCR過表達(dá)中表達(dá)顯著上調(diào)。FACS分析檢測到CD24 +和CD133 +細(xì)胞群明顯上調(diào)。

    與載體對照相比，BXPC-3細(xì)胞中的DANCR過表達(dá)顯著提高了腫瘤的生長速度和腫瘤的大小。DANCR KO抑制了腫瘤生長和腫瘤大小。在該原位模型中，DANCR KO對腫瘤生長的抑制作用甚至比皮下注射的抑制作用更大。

    RIP分析顯示，與IgG對照相比，IGF2BP2顯著富集DANCR。RNA pulldown+WB顯示IGF2BP2與DANCR結(jié)合。 actinomycin D 處理后發(fā)現(xiàn)，GF2BP2-siRNA處理的細(xì)胞中，DANCR衰變比對照siRNA處理的細(xì)胞快。IGF2BP2 KO還引起了DANCR RNA更快的衰變，表明IGF2BP2可以提高DANCR RNA的穩(wěn)定性。IGF2BP家族參與RNA甲基化途徑并起RNA穩(wěn)定劑的作用，為了確定DANCR是否受到RNA甲基化（m6A）的影響，從而使甲基化的DANCR被IGF2BP2識別，我們使用m6A抗體進(jìn)行了RIP分析，并確定DANCR的富集程度是IgG對照的6倍。RNA pulldown+WB驗(yàn)證了這一結(jié)果，檢查DANCR序列，我們在664號核苷酸處發(fā)現(xiàn)了一個潛在的m6A基序，突變后m6A水平顯著降低。這些結(jié)果表明，與許多其他mRNA一樣，DANCR也可以在m6A處被甲基化。IGF2BP2用作甲基化DANCR的閱讀器，以增加其穩(wěn)定性。

    研究發(fā)現(xiàn)胰腺癌中IGF2BP2的上調(diào)與不良的臨床預(yù)后相關(guān)。IGF2BP2與DANCR共同起作用以調(diào)節(jié)其穩(wěn)定性。在腫瘤細(xì)胞中，IGF2BP2上調(diào)，這增加了IGF2PB2與DANCR相互作用并使其穩(wěn)定的機(jī)會，尤其是當(dāng)RNA甲基化機(jī)制失調(diào)時。在腫瘤細(xì)胞中，IGF2BP2上調(diào)，這增加了IGF2PB2與DANCR相互作用并使其穩(wěn)定的機(jī)會，尤其是當(dāng)RNA甲基化機(jī)制失調(diào)時。