癌細(xì)胞分泌的外泌體促進(jìn)骨髓轉(zhuǎn)移
癌細(xì)胞分泌的外泌體促進(jìn)骨髓轉(zhuǎn)移
導(dǎo)語：腫瘤微環(huán)境是腫瘤進(jìn)展的關(guān)鍵要素，骨髓基質(zhì)作為一種獨(dú)特的轉(zhuǎn)移微環(huán)境，通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞存活，促進(jìn)轉(zhuǎn)移過程。外泌體可以介導(dǎo)小分子從腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移到遠(yuǎn)處器官的靶細(xì)胞，促進(jìn)轉(zhuǎn)移定植。癌細(xì)胞分泌的外泌體是否骨髓轉(zhuǎn)移？小編這里有話說。
參考文獻(xiàn)：Colletti M , Tomao L , Galardi A , et al. Neuroblastoma-secreted exosomes carrying miR5 promote osteogenic differentiation of bone-marrow mesenchymal stromal cells[J]. Journal of Extracellular Vesicles, 2020, 9(1):1774144. （IF: 14.976）
技術(shù)路線：
結(jié)果：
1. 成神經(jīng)細(xì)胞瘤（NB）伴骨髓（BM）轉(zhuǎn)移患者的BM-MSCs具有較強(qiáng)的成骨能力
從12例NB患兒和7例健康對照(HC)患兒中分離并鑒定BM-MSCs，在NB患者中，8例呈現(xiàn)BM轉(zhuǎn)移（MBM-MSCs、轉(zhuǎn)移性骨髓-MSCs），4例無BM轉(zhuǎn)移（NMBM-MSCs、非轉(zhuǎn)移性骨髓MSCs）。分析MSC細(xì)胞免疫表型，檢測間充質(zhì)、造血和神經(jīng)元標(biāo)志物的表達(dá)。MBM-MSCs中鈣沉積含量較高，成骨分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子，成骨標(biāo)志物表達(dá)更高。以上表明，與無骨髓轉(zhuǎn)移患者的BM-MSCs相比，從有骨髓浸潤的NB患者中分離的BM-MSCs具有更強(qiáng)的成骨分化能力。
2. 來源于BM轉(zhuǎn)移的NB細(xì)胞的外泌體可增強(qiáng)HC-MSCs的成骨作用
探索骨髓轉(zhuǎn)移衍生的NB細(xì)胞系產(chǎn)生的外泌體是否與BM-MSCs的相互作用，原發(fā)性（PT）腫瘤細(xì)胞系(IMR32，IGR-NB8)和五個(gè)BM轉(zhuǎn)移衍生的NB細(xì)胞系(SKNSH，SH5YSY，SKNBe2 c，LAN-1，IGR-N91)分離外泌體，發(fā)現(xiàn)NB細(xì)胞來源的外泌體被HC-MSCs有效內(nèi)化，誘導(dǎo)細(xì)胞成骨mRNA的表達(dá)和更高的鈣沉積含量。這些數(shù)據(jù)表明，BM轉(zhuǎn)移來源的NB細(xì)胞釋放的外泌體在調(diào)節(jié)BM-MSCs成骨分化。
3. MiR-375在BM轉(zhuǎn)移來源的NB細(xì)胞系釋放的外泌體中和MBM-MSCs中高表達(dá)
分析PT來源和BM轉(zhuǎn)移來源細(xì)胞系之間外泌體miRNA的表達(dá)水平，5個(gè)miRNA表達(dá)上調(diào)，miR-375的水平更高，與SHSY5Y-外泌體共培養(yǎng)可顯著增加HC-MSCs中miR-375的表達(dá)。靶標(biāo)預(yù)測分析miR-375的潛在靶標(biāo)Yes蛋白相關(guān)蛋白1(YAP1)和含有mTOR相互作用蛋白的DEP結(jié)構(gòu)域(DEPTOR)。與PT來源的細(xì)胞系相比，NB BM轉(zhuǎn)移中YAP1和DEPTOR表達(dá)水平均較低，YAP1及其磷酸化形式(YAP1-p)在NB BM轉(zhuǎn)移來源的細(xì)胞系中均不表達(dá)，DEPTOR在分析的所有NB細(xì)胞系中大量表達(dá)，在轉(zhuǎn)移性細(xì)胞系中少量表達(dá)。
4. MiR-375調(diào)節(jié)成骨轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)
為證實(shí)MiR-375參與BMMSCs成骨分化，在NMBM-MSC中過表達(dá)或敲除MiR-375，miR-375的過表達(dá)顯著降低其靶基因YAP1表達(dá)，在較小程度上降低DEPTOR，增加成骨標(biāo)志物表達(dá)。抑制miR-375 顯著上調(diào)YAP1和DEPTOR，未觀察到參與成骨細(xì)胞分化的基因的下調(diào)。
5. MiR-375表達(dá)與NB患者BM疾病相關(guān)
為檢測NB患者MiR-375表達(dá)水平與BM浸潤之間的可能相關(guān)性，從HC、NMBM患者或MBM患者的外周血血漿和骨髓血漿中分離外泌體，發(fā)現(xiàn)MBM患者外泌體中miR-375水平顯著高于NMBM患者，miR-375的陽性染色與轉(zhuǎn)移分期和BM浸潤相關(guān)。為確定NB來源的外泌體是否能夠到達(dá)BM，我們在NOD SCID小鼠注射PKH26標(biāo)記的外泌體，證實(shí)BM細(xì)胞攝取外泌體，外泌體攜帶miR-375并能夠?qū)⑵滢D(zhuǎn)移到骨髓MSCs。以上表明，循環(huán)外泌體和骨髓中高水平的miR-375與骨髓轉(zhuǎn)移有關(guān)。
