Caspase-11介導(dǎo)的肝細(xì)胞焦亡促進非酒精性脂肪性肝炎的進展

欄目:最新研究動態(tài) 發(fā)布時間:2021-07-01
本研究探討了Caspase-11在NASH中的潛在作用。NASH小鼠肝臟中Caspase-11表達上調(diào).MCD處理的......

    非酒精性脂肪性肝炎(NASH)是一種結(jié)果嚴(yán)重的炎癥性疾病。肝細(xì)胞死亡,包括凋亡、壞死和焦亡,在NASH的病理生理學(xué)中已被證實。到目前為止,Caspase-11NASH中的確切作用仍不清楚。本文詳細(xì)介紹了20214月發(fā)表于Cell Mol Gastroenterol HepatolIF=7.706)的文章Caspase-11–Mediated Hepatocytic Pyroptosis Promotes the Progression of Nonalcoholic Steatohepatitis。本研究探討了Caspase-11NASH中的潛在作用。NASH小鼠肝臟中Caspase-11表達上調(diào)。MCD處理的Caspase-11缺乏的小鼠肝損傷、纖維化和炎癥減輕。MCD治療后Caspase-11缺乏小鼠Gasdermin DIL-1β的激活被抑制。過表達Caspase-11促進脂肪性肝炎。

技術(shù)路線

結(jié)果

1.        肝脂肪變性小鼠肝臟中Caspase-11表達上調(diào)和激活

為了探討Caspase-11在肝脂肪變性中的作用,我們首先檢測了肝脂肪變性小鼠肝臟中Caspase-11的表達。如圖1A所示,與正常小鼠相比,MCD誘導(dǎo)的肝脂肪變性小鼠肝臟中Caspase-11 mRNA明顯增加。相應(yīng)的,在MCD誘導(dǎo)的肝脂肪變性小鼠的肝臟中,pro-caspase-11(1BC)cleaved-caspase-11(1BD)的蛋白水平均顯著上調(diào)。這些結(jié)果提示Caspase-11與肝臟脂肪變性呈正相關(guān)。

 

2.        Caspase-11 缺乏減弱MCD誘導(dǎo)的小鼠肝脂肪變性

為了評估Caspase-11對肝脂肪變性的潛在影響,我們在Caspase-11缺陷小鼠中誘導(dǎo)肝脂肪變性并監(jiān)測表型。正常野生型和Caspase-11缺陷小鼠肝臟組織學(xué)表現(xiàn)正常。野生型小鼠經(jīng)MCD治療后,肝臟出現(xiàn)明顯的脂肪變性和腫脹。與MCD處理的野生型小鼠相比,MCD處理的Caspase-11缺陷小鼠的脂肪變性和腫脹明顯減少(2A)。相應(yīng)的,與MCD處理的野生型小鼠相比,MCD處理Caspase-11缺陷小鼠肝臟脂肪變性評分(2B)和膨脹評分(2C)顯著降低。我們進一步發(fā)現(xiàn),MCD處理的Caspase-11缺陷小鼠顯示更低的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平(2D)、血清天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平(2E)和肝臟甘油三酯水平(2F)。總之,我們的結(jié)果表明Caspase-11缺陷減輕了MCD誘導(dǎo)的小鼠肝臟脂肪變性。

 

3.        Caspase-11缺乏減弱NASH小鼠的肝纖維化

 通過測量纖維化相關(guān)因子的表達我們評估Caspase-11缺失對MCD誘導(dǎo)的肝纖維化的影響。在正常條件下,野生型和Caspase-11缺陷小鼠的TGF-β(3A)、α-Sma(3B)Col1a1(3C)表達相似。MCD處理的野生型小鼠中TGF-β、α-SmaCol1a1的表達顯著上調(diào)。相比之下,MCD處理的Caspase-11缺陷小鼠TGF-β、α-SmaCol1a1mRNA水平顯著降低。這些結(jié)果表明,Caspase-11缺乏可減少MCD處理小鼠的肝纖維化。

4.        Caspase-11缺失抑制MCD誘導(dǎo)的肝臟炎癥

接下來,我們評估了Caspase-11缺乏對MCD誘導(dǎo)炎癥的影響。首先,我們比較了野生型和Caspase-11缺陷小鼠肝臟白細(xì)胞浸潤情況。在正常情況下,野生型小鼠和caspase-11缺陷小鼠肝臟中CD45細(xì)胞的比例相似(4AB)。MCD治療導(dǎo)致野生型小鼠肝臟中CD45細(xì)胞的比例增加。相比之下,MCD治療僅輕微增加了Caspase11缺陷小鼠肝臟中CD45細(xì)胞的比例。與MCD處理的野生型小鼠相比,MCD處理的Caspase-11缺陷小鼠肝臟中CD45細(xì)胞的比例明顯下降(4AB),表明MCD處理后Caspase-11缺陷導(dǎo)致肝臟中白細(xì)胞浸潤減少。相應(yīng)地,我們發(fā)現(xiàn)了MCD治療促進肝臟F4/80的表達而Caspase-11缺乏則抑制MCD誘導(dǎo)的F4/80上調(diào)(4C)。我們進一步發(fā)現(xiàn)MCD治療誘導(dǎo)野生型小鼠肝臟中TNF-α(4D)IL-1β(4E)CCL2(4F)的表達。相比之下,與MCD處理的野生型小鼠相比,MCD處理的Caspase-11缺陷小鼠肝臟中TNF-α(4D)、IL-1β(4E)CCL2(4F)蛋白水平顯著降低。這些結(jié)果表明Caspase-11缺陷抑制了MCD誘導(dǎo)的肝臟炎癥

 

5.        Caspase-11缺乏抑制小鼠肝細(xì)胞焦亡

我們評估了Caspase-11缺乏對MCD處理后小鼠焦亡活化的影響。我們檢測了GsdmdIL-1β的激活,這是焦亡的兩個關(guān)鍵因素。我們在未處理的野生型和Caspase-11缺陷小鼠肝臟中檢測到類似的Gsdmd(5AB)Gsdmd-N(5AC)pro-IL-1β(5AD)蛋白水平。此外,我們在野生型和Caspase-11缺陷小鼠的肝臟中均未檢測到成熟的IL-1β蛋白(5 AE)。MCD處理誘導(dǎo)了野生型小鼠肝臟中pro-Gsdmd(5AB)Gsdmd-N(5AC)、pro-IL-1β(5AD)和成熟IL-β(5AE)的表達,表明MCD誘導(dǎo)了GsdmdIL-1β的激活。相比之下,與MCD處理的野生型相比,MCD處理的Caspase-11缺陷小鼠肝臟中pro-Gsdmd(5AB)Gsdmd-N(5AC)、pro-IL-1β(5AD)和成熟IL-β(5AE)的蛋白水平顯著降低。野生型小鼠和Caspase11缺陷小鼠肝臟中pro-caspase-1(5AF)cleaved caspase-1(5AG)的蛋白水平相似。在野生型小鼠和Caspase-11缺陷小鼠中,MCD處理顯著降低了pro-caspase 1的蛋白水平(5AF),而增加了活性Caspase-1的蛋白水平(5AG)。此外,Caspase-11缺陷小鼠的活性caspase-1水平明顯低于野生型小鼠,說明MCD處理Caspase-11缺陷小鼠肝臟中Caspase-1的激活較少。同樣,我們在MCD處理的Caspase-11缺陷小鼠的肝細(xì)胞中檢測到較少的Gsdmd-N表達(5HI)。這些結(jié)果表明,Caspase-11缺失減弱了MCD誘導(dǎo)的GsdmdIL-1β的激活。

6.        Caspase-11缺乏抑制脂多糖誘導(dǎo)的肝細(xì)胞焦亡和體外損傷

我們在體外評價Caspase-11缺乏對肝細(xì)胞焦亡的影響。我們用脂多糖(LPS)處理野生型小鼠原代肝細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)LPS誘導(dǎo)了pro-caspase-11caspase-11的表達(6AB),表明LPS誘導(dǎo)了原代肝細(xì)胞中caspase-11的激活。我們進一步處理來自野生型和Caspase-11缺陷小鼠的原代肝細(xì)胞,并監(jiān)測Gsdmd的表達和激活。如圖6CD所示,LPS處理未在野生型和Caspase-11缺陷的原代肝細(xì)胞中誘導(dǎo)pro-Gsdmd的表達。我們檢測到LPS處理的野生型小鼠原代肝細(xì)胞中Gsdmd-N明顯增加。相比之下,LPS處理不影響Caspase-11缺陷小鼠原代肝細(xì)胞的Gsdmd-N水平,且Gsdmd-N水平顯著低于野生型小鼠原代肝細(xì)胞。此外,LPS誘導(dǎo)野生型原代肝細(xì)胞中IL-1β(6E)、ALT(6F)AST(6G)的表達。相反,在Caspase11缺陷的原發(fā)性肝細(xì)胞中,LPS誘導(dǎo)的IL-1β(6E)、ALT(6F)AST(6G)的產(chǎn)生顯著減少。綜上所述,Caspase-11的缺失抑制了LPS誘導(dǎo)的Caspase-11GSDMD的體外激活。

7.        抑制NF-kB可抑制LPSMCD誘導(dǎo)的Caspase-11表達

NF-kB已被證明在Caspase-11的表達和NASH發(fā)展中起重要作用。為了檢測NF-kB是否參與LPSMCD誘導(dǎo)的Caspase-11表達,我們在LPS處理的原代肝細(xì)胞和MCD處理的小鼠中使用NF-kB抑制劑JSH-23。如圖7A所示,LPS處理促進了Caspase-11 mRNA的表達,而JSH-23則抑制了LPS誘導(dǎo)的caspase-11的上調(diào)。相應(yīng)的,我們檢測到LPS處理的原代肝細(xì)胞中pro-caspase-11蛋白水平顯著升高,而JSH-23/LPS處理的原代肝細(xì)胞中pro-caspase-11蛋白水平顯著降低(7BC)。MCD處理誘導(dǎo)野生型小鼠肝臟中Caspase-11 mRNA(7D)和蛋白(7EF)的表達。相比之下,JSH-23治療可抑制MCD誘導(dǎo)的Caspase-11的表達

 

8.        過表達Caspase-11加重MCD誘導(dǎo)的小鼠肝脂肪變性

由于缺乏Caspase-11減弱MCD誘導(dǎo)的肝脂肪變性,我們檢測肝臟中Caspase-11過表達對MCD誘導(dǎo)的肝脂肪變性的影響。我們在Alb-Cre小鼠肝細(xì)胞中過表達Caspase-11(8A)。正常情況下,對照組和過表達Caspase11的小鼠肝臟組織學(xué)形態(tài)正常。MCD處理導(dǎo)致對照和過表達Caspase11的小鼠肝臟出現(xiàn)明顯的脂質(zhì)積聚(空泡)。此外,過表達caspase-11的小鼠肝臟中的空泡比對照小鼠肝臟中的大且多(8B)。相應(yīng)的,與MCD處理的對照組相比,過表達Caspase-11的小鼠脂肪變性評分(8C)和膨脹評分(8D)顯著升高。類似地,與對照組小鼠相比,MCD處理的caspase-11過表達的的小鼠血清中ALT(8E)、AST(8F)和肝臟甘油三酯(8G)升高。為了進一步確定過表達的Caspase-11是否足以加重MCD誘導(dǎo)的NASH,我們給小鼠使用了Caspase-1抑制劑belnacasanbelnacasan治療顯著降低MCD治療對照組小鼠的脂肪變性評分(8H)。相比之下,belnacasan治療不影響MCD處理的Caspase-11過表達小鼠的脂肪變性評分。同樣,belnacasan處理顯著降低了MCD處理對照組小鼠的腫脹評分(8I)、血清ALT(8J)AST(8K)和肝臟甘油三酯(8L),而MCD處理過表達Caspase-11小鼠的這些指標(biāo)沒有明顯影響。綜上所述,過表達Caspase-11足以促進MCD誘導(dǎo)的小鼠脂肪性肝炎的嚴(yán)重程度。

結(jié)論

MCD處理后Caspase-11缺陷小鼠的肝損傷、纖維化和炎癥明顯減輕。Caspase-11缺失可改善NASH患者的肝細(xì)胞焦亡。