乳腺癌轉(zhuǎn)移新機(jī)制的關(guān)鍵信號(hào)分子——ActA

       盡管人們對(duì)乳腺癌已經(jīng)進(jìn)行了廣泛的研究，但乳腺癌仍然是造成女性死亡的主要癌癥之一，也是女性中最常見(jiàn)的癌癥。乳腺癌的死亡率幾乎完全是腫瘤轉(zhuǎn)移的結(jié)果。轉(zhuǎn)移性癌癥在很大程度上是無(wú)法治愈的，是癌癥相關(guān)死亡的主要原因。轉(zhuǎn)移性微環(huán)境有利于轉(zhuǎn)移灶的形成。癌癥相關(guān)成纖維細(xì)胞（CAFs）是通過(guò)介導(dǎo)炎癥微環(huán)境產(chǎn)生適宜轉(zhuǎn)移生態(tài)位的關(guān)鍵參與者。成纖維細(xì)胞在改變細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的結(jié)構(gòu)和硬度方面也起著核心作用。解決轉(zhuǎn)移生態(tài)位的早期變化可以幫助確定抑制轉(zhuǎn)移進(jìn)展的方法。作者在小鼠自發(fā)性乳腺癌肺轉(zhuǎn)移模型中證明，肺成纖維細(xì)胞的纖維化改變和重新布線發(fā)生在轉(zhuǎn)移前階段，表明原發(fā)腫瘤的全身性影響。激活素A （ActA）是TGFβ超家族成員，從乳腺腫瘤中分泌，其在荷瘤小鼠血液中的水平高度升高。ActA上調(diào)肺成纖維細(xì)胞中促纖維化因子的表達(dá)，導(dǎo)致肺轉(zhuǎn)移前生態(tài)位膠原沉積增強(qiáng)。ActA信號(hào)在肺轉(zhuǎn)移中具有重要的功能，因?yàn)樵谌橄侔┘?xì)胞中靶向ActA可顯著減輕肺轉(zhuǎn)移并提高生存率。該文章于2023年10月發(fā)表在《Cancer Research》，IF： 11.2。

技術(shù)路線

技術(shù)路線圖

主要研究結(jié)果

1. 肺轉(zhuǎn)移與膠原沉積增加有關(guān)，從轉(zhuǎn)移前生態(tài)位開(kāi)始

       作者之前分析了肺轉(zhuǎn)移不同階段與轉(zhuǎn)移相關(guān)的成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組，發(fā)現(xiàn)它們激活了與ECM重塑和膠原沉積相關(guān)的基因程序。因此，作者著手研究這些基因程序如何在轉(zhuǎn)移生態(tài)位的肺成纖維細(xì)胞中被激活，以及它們?nèi)绾斡绊懭橄侔┑霓D(zhuǎn)移性復(fù)發(fā)。作者首先分析了MMTV-PyMT小鼠肺中的膠原沉積，MMTV-PyMT是一種發(fā)生自發(fā)肺轉(zhuǎn)移的乳腺癌模型。與FVB/n對(duì)照小鼠的正常肺相比，使用二次諧波生成（SHG）顯微鏡觀察轉(zhuǎn)移性MMTV-PyMT肺中的纖維膠原（圖1A）。為了量化腫瘤誘導(dǎo)的膠原纖維組織變化，作者使用了TWOMBLI插件。分析顯示，在有轉(zhuǎn)移的肺中，膠原纖維的面積、長(zhǎng)度和密度明顯更高（圖1B）。有趣的是，先前有報(bào)道稱，在比較正常乳腺和乳腺腫瘤時(shí)，纖維取向從各向同性變?yōu)楦飨虍愋?。作者的研究結(jié)果表明，與原發(fā)腫瘤相比，不同的ECM調(diào)節(jié)機(jī)制在轉(zhuǎn)移部位起作用。膠原纖維Picrosirius Red染色定量證實(shí)，荷瘤小鼠肺中膠原沉積明顯增加（圖1C，D）。此外，肺部纖維化區(qū)域的評(píng)分顯示，MMTV-PyMT小鼠的肺部與對(duì)照組相比，高評(píng)分纖維化區(qū)域的發(fā)生率更高（圖1E）。為了證實(shí)這些發(fā)現(xiàn)不是模型特異性的，作者還分析了轉(zhuǎn)移到肺部的三陰性乳腺癌（4T1癌細(xì)胞）可移植模型中的膠原沉積。該分析證實(shí)，與正常BALB/c對(duì)照小鼠相比，注射4T1后肺轉(zhuǎn)移小鼠肺內(nèi)膠原沉積明顯增多（圖1F-H）。因此，肺轉(zhuǎn)移與肺纖維化有關(guān)。

       考慮到作者之前在肺轉(zhuǎn)移不同階段的成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的發(fā)現(xiàn)表明膠原沉積的變化是一個(gè)早期事件，作者接下來(lái)研究了肺轉(zhuǎn)移過(guò)程中纖維化變化的時(shí)間。因此，作者分析了MMTV-PyMT小鼠在腫瘤進(jìn)展的不同階段肺中的膠原含量。與乳腺增生（7-8周齡，未形成明顯轉(zhuǎn)移灶）或轉(zhuǎn)移癌（14-16周齡）的MMTV-PyMT小鼠肺相比，正常肺的馬氏三色顯示，早在肺轉(zhuǎn)移發(fā)生前的增生性階段，肺膠原沉積就發(fā)生了顯著變化（圖1 - l）。有趣的是，與正常相比，膠原沉積的增強(qiáng)在乳腺增生小鼠的轉(zhuǎn)移前肺中最為明顯（圖1J，L），進(jìn)一步表明纖維化變化是在可檢測(cè)的轉(zhuǎn)移病變形成之前的早期事件。

2.腫瘤細(xì)胞分泌因子激活肺成纖維細(xì)胞的促纖維化程序

       接下來(lái)，作者著手研究肺中膠原沉積的增強(qiáng)是否與體內(nèi)荷瘤小鼠肺成纖維細(xì)胞中促纖維化基因程序的激活有關(guān)。為了能夠無(wú)偏分離成纖維細(xì)胞，作者將MMTV-PyMT小鼠模型與在膠原-1a啟動(dòng)子（Col1a1-YFP）下表達(dá)熒光報(bào)告基因YFP的轉(zhuǎn)基因小鼠雜交，建立了所有成纖維細(xì)胞都被熒光標(biāo)記的PyMT；Col1a1-YFP轉(zhuǎn)基因小鼠。用流式細(xì)胞術(shù)從正常Col1a1-YFP小鼠肺、乳腺增生（轉(zhuǎn)移前）的Col1a1-YFP小鼠肺或轉(zhuǎn)移小鼠肺中分離肺成纖維細(xì)胞。有趣的是，表達(dá)分析顯示，從前轉(zhuǎn)移性肺分離的肺成纖維細(xì)胞中，促纖維化基因的表達(dá)已經(jīng)上調(diào)（Pre-Met LFs；圖2A），與正常肺成纖維細(xì)胞（NLFs）以及轉(zhuǎn)移相關(guān)成纖維細(xì)胞（MAFs）相比，從轉(zhuǎn)移肺中分離出來(lái)（圖2C）。作者將結(jié)果整合到由Col1a1、Acta2、Ctgf、Lox、Loxl2、Sparc和Serpine1聯(lián)合表達(dá)組成的“纖維化評(píng)分”中，并證實(shí)肺Pre-Met LFs和MAFs都以促纖維化基因程序的激活為特征（圖2B， D）。

       由于在彌散性腫瘤細(xì)胞定植之前，乳腺癌早期就出現(xiàn)了肺部膠原沉積的增加，因此作者假設(shè)肺成纖維細(xì)胞的促纖維化激活可能是由原發(fā)腫瘤分泌的因子通過(guò)系統(tǒng)性信號(hào)傳導(dǎo)引起的，從而誘導(dǎo)形成一個(gè)適宜的纖維化轉(zhuǎn)移前生態(tài)位。為了驗(yàn)證這一假設(shè)，作者首先分析了與源自PyMT腫瘤的Met-1細(xì)胞分泌因子孵育的NLFs中促纖維化基因特征的表達(dá)。該分析顯示，與對(duì)照組相比，激活的NLFs中多個(gè)促纖維化基因的表達(dá)明顯上調(diào)（圖2E，F(xiàn)）。由于已知TGF-β信號(hào)在傷口愈合、纖維化和腫瘤進(jìn)展的結(jié)締組織增生反應(yīng)中對(duì)誘導(dǎo)膠原沉積起重要作用，作者還測(cè)試了TGF-β信號(hào)是否在與癌細(xì)胞分泌因子一起培養(yǎng)的NLFs中被激活。事實(shí)上，NLFs與腫瘤細(xì)胞條件培養(yǎng)基（CM）孵育導(dǎo)致SMAD2和SMAD3磷酸化增加，表明腫瘤分泌因子激活了典型的TGF-β信號(hào)通路（圖2G）。為了評(píng)估腫瘤分泌因子是否通過(guò)系統(tǒng)性信號(hào)傳導(dǎo)影響轉(zhuǎn)移前生態(tài)位的肺成纖維細(xì)胞，作者分析了荷瘤小鼠血液中分泌因子對(duì)肺成纖維細(xì)胞活化的影響。將NLFs與荷瘤MMTV-PyMT小鼠或正常FVB/n小鼠的血漿孵育（圖2H），并分析促纖維化基因特征的表達(dá)。作者發(fā)現(xiàn)MMTV-PyMT小鼠血漿中的因子上調(diào)了正常肺成纖維細(xì)胞中促纖維化基因的表達(dá)（圖2I）。

       作者接下來(lái)研究腫瘤分泌因子是否影響成纖維細(xì)胞膠原的生成和沉積。為了驗(yàn)證這一點(diǎn)，NLFs與腫瘤細(xì)胞分泌因子或?qū)φ諢o(wú)血清培養(yǎng)基（SFM）孵育，并允許生成細(xì)胞衍生基質(zhì)（CDM）。成纖維細(xì)胞來(lái)源的膠原基質(zhì)的SHG成像顯示，與腫瘤細(xì)胞CM孵育的NLFs相比，與SFM孵育的NLFs產(chǎn)生了更致密的膠原基質(zhì)（圖2J-L）。綜上所述，這些結(jié)果表明，肺成纖維細(xì)胞被腫瘤分泌因子激活，通過(guò)SMAD信號(hào)通路上調(diào)促纖維化基因的表達(dá)，增加膠原沉積。

圖1 乳腺癌的進(jìn)展與肺部膠原沉積增強(qiáng)有關(guān)

3. ActA在乳腺腫瘤和肺轉(zhuǎn)移中全身性和局部上調(diào) 

       為了確定可能參與肺成纖維細(xì)胞活化的全身性腫瘤分泌因子，作者對(duì)正常FVB/n小鼠和荷瘤MMTV-PyMT小鼠的血漿進(jìn)行了蛋白質(zhì)組學(xué)分析（圖3A）。作者在蛋白質(zhì)陣列中確定了MMTV-PyMT小鼠血漿中上調(diào)最多的50種蛋白質(zhì)，并使用VarElect工具對(duì)其進(jìn)行了進(jìn)一步分析，該工具可以對(duì)與特定查詢條件相關(guān)的基因進(jìn)行優(yōu)先排序。使用“膠原合成”作為關(guān)鍵詞的分析在高分基因中確定了抑制素β A （INHBA）（圖3B）。編碼蛋白INHBA是一個(gè)亞基，可以與抑制素家族的其他亞基二聚形成功能二聚體，其中一個(gè)是激活素a（ActA），一個(gè)由兩個(gè)INHBA亞基組成的二聚體。激活蛋白是TGF-β超家族配體的成員，是已知的纖維化激活因子，因此作者決定進(jìn)一步研究ActA。

圖2 腫瘤激活的肺成纖維細(xì)胞表達(dá)促成纖維基因并表現(xiàn)出膠原沉積增加

       分泌的ActA先前參與促進(jìn)腫瘤進(jìn)展和纖維化疾病，并被證明通過(guò)SMAD2/3信號(hào)通路激活Col1α和其他纖維化相關(guān)基因的表達(dá)。因此，作者開(kāi)始評(píng)估乳腺癌進(jìn)展過(guò)程中ActA水平的變化。與荷瘤MMTV-PyMT小鼠相比，正常FVB/n小鼠血漿中ActA水平的分析證實(shí)，荷瘤小鼠中ActA水平顯著升高（圖3C）。此外，對(duì)單個(gè)小鼠血漿樣本的縱向分析顯示，ActA水平隨著疾病進(jìn)展而增加（圖3D）。對(duì)正常FVB/n小鼠和荷瘤MMTV-PyMT小鼠乳腺和肺組織中ActA水平的分析進(jìn)一步證實(shí)，荷瘤小鼠兩組織中ActA水平均顯著高于對(duì)照組（圖3E，F(xiàn)）。

圖3 循環(huán)ActA水平隨著疾病進(jìn)展而增加

       MMTV-PyMT是一種小鼠腔內(nèi)乳腺癌模型。為了測(cè)試ActA的上調(diào)是否在其他乳腺癌類型中是一個(gè)普遍的機(jī)制，作者分析了注射4T1細(xì)胞的荷瘤小鼠血漿中ActA的水平。作者發(fā)現(xiàn)，與正常BALB/c小鼠相比，原位注射4T1細(xì)胞的小鼠血漿中ActA水平升高（圖3G），證實(shí)該途徑在多種乳腺癌亞型中有效。此外，小鼠的縱向隨訪表明，在可移植模型中，血漿ActA水平也隨著疾病的進(jìn)展而升高（圖3H）。

       4T1細(xì)胞最初是作為一系列轉(zhuǎn)移效率增加的細(xì)胞系的一部分建立的，從67NR（非轉(zhuǎn)移）到4T1（高度轉(zhuǎn)移）。有趣的是，在包含4T1細(xì)胞系系列質(zhì)譜數(shù)據(jù)的公開(kāi)數(shù)據(jù)集中對(duì)ActA分泌水平的分析顯示，ActA分泌增加與轉(zhuǎn)移能力相關(guān)（圖3I），進(jìn)一步表明ActA在支持轉(zhuǎn)移進(jìn)展中的作用。

       為了評(píng)估ActA是否足以誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞的促纖維化信號(hào)，作者將外源性ActA孵育NLFs，并分析其促纖維化基因特征的表達(dá)。結(jié)果表明，ActA誘導(dǎo)了NLFs中促纖維化基因特征的表達(dá)（圖3J，K）。此外，與SFM培養(yǎng)的NLFs相比，ActA培養(yǎng)的NLFs產(chǎn)生的CDM顯示出更密集的膠原沉積（圖3L-N）。為了進(jìn)一步評(píng)估ActA是否有必要增強(qiáng)肺成纖維細(xì)胞的膠原沉積，作者用MMTV-PyMT癌細(xì)胞分泌因子（Met-1 CM）或Met-1 CM補(bǔ)充ActA的中和抗體或外源性Follistatin （Fst） （ActA的天然拮抗劑）培養(yǎng)NLFs。分析結(jié)果顯示，當(dāng)ActA被抑制時(shí)，活化的成纖維細(xì)胞的膠原沉積顯著減少（圖3O，P），證實(shí)了ActA對(duì)于成纖維細(xì)胞的促纖維化活化是必要的。

       綜上所述，這些數(shù)據(jù)表明，在荷瘤小鼠中，原發(fā)性乳腺腫瘤分泌的ActA在局部和全身都有所增加，其水平與腫瘤的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移有關(guān)。此外，這些發(fā)現(xiàn)表明，在肺成纖維細(xì)胞中，腫瘤介導(dǎo)的成纖維信號(hào)的誘導(dǎo)是由ActA的分泌促進(jìn)的。 

4. 系統(tǒng)性ActA誘導(dǎo)肺轉(zhuǎn)移前生態(tài)位的膠原沉積，促進(jìn)肺轉(zhuǎn)移性復(fù)發(fā) 

       為了評(píng)估ActA在誘導(dǎo)肺纖維化轉(zhuǎn)移前生態(tài)位中的功能作用，作者使用shRNA轉(zhuǎn)導(dǎo)降低了其在4T1癌細(xì)胞中的表達(dá)。作者使用了兩個(gè)單獨(dú)的敲低（KD） shrna （shActA）和一個(gè)亂序控制結(jié)構(gòu)（shScr）。qRT-PCR在mRNA表達(dá)水平和ELISA在蛋白分泌水平均證實(shí)了ActA的表達(dá)KD（圖4A，B）。作者初步分析了ActA的KD是否影響原發(fā)腫瘤的生長(zhǎng)。對(duì)原位注射腫瘤的分析顯示，雖然ActA KD腫瘤的生長(zhǎng)與對(duì)照腫瘤相比略有減少（圖4C），但在切除時(shí)腫瘤體積沒(méi)有顯著差異（圖4D）。接下來(lái)，作者研究了ActA是否對(duì)成纖維細(xì)胞激活和早期肺中的膠原沉積具有重要的功能，從而產(chǎn)生纖維化轉(zhuǎn)移前生態(tài)位。作者將4T1 ActA KD細(xì)胞原位注射到Col1a1啟動(dòng)子下表達(dá)YFP的轉(zhuǎn)基因BALB/c小鼠的乳腺中，以促進(jìn)使用FACS從轉(zhuǎn)移前肺中分離肺成纖維細(xì)胞。原位注射后3周，在大轉(zhuǎn)移灶形成之前采集肺（圖4E）。值得注意的是，與從對(duì)照腫瘤小鼠分離的成纖維細(xì)胞相比，原發(fā)腫瘤中ActA的KD導(dǎo)致肺成纖維細(xì)胞中原纖維化基因的表達(dá)急劇降低（由聯(lián)合纖維化評(píng)分確定）（圖4F）。同樣，通過(guò)YFP+細(xì)胞的平均熒光強(qiáng)度測(cè)量，在KD腫瘤小鼠的肺成纖維細(xì)胞中，Col1a1啟動(dòng)子激活顯著降低（圖4G），暗示ActA信號(hào)在肺成纖維細(xì)胞的促纖維化激活中起作用。此外，肺組織切片膠原的Masson三色染色證實(shí)，與對(duì)照腫瘤小鼠相比，ActA KD顯著減少了ActA KD腫瘤小鼠肺部膠原沉積（圖4H，I）。因此，來(lái)自原發(fā)腫瘤的系統(tǒng)性ActA在轉(zhuǎn)移前肺中激活肺成纖維細(xì)胞向纖維化前表型發(fā)展，導(dǎo)致膠原表達(dá)和沉積增加。

       最后，作者通過(guò)對(duì)注射ActA KD細(xì)胞或?qū)φ招∈筮M(jìn)行分析，研究了ActA信號(hào)在原發(fā)性乳腺腫瘤手術(shù)切除后促進(jìn)肺轉(zhuǎn)移性復(fù)發(fā)中的功能作用（圖5A）。在腫瘤切除前不久和切除后2周抽取血樣。雖然血液中殘留的ActA表明其他宿主細(xì)胞也對(duì)全身ActA有貢獻(xiàn)，但切除原發(fā)腫瘤足以顯著降低其血液水平，表明原發(fā)腫瘤確實(shí)是全身ActA的主要來(lái)源（圖5B）。值得注意的是，在對(duì)照組中，一些小鼠在腫瘤切除兩周后血液中ActA水平升高，這表明新出現(xiàn)的肺轉(zhuǎn)移可能已成為系統(tǒng)性ActA的來(lái)源。

       為了評(píng)估ActA抑制對(duì)肺轉(zhuǎn)移負(fù)荷的影響，作者通過(guò)CT成像進(jìn)行了肺內(nèi)轉(zhuǎn)移進(jìn)展成像。原發(fā)腫瘤切除兩周后的轉(zhuǎn)移負(fù)荷分析表明，注射shActA癌細(xì)胞的小鼠轉(zhuǎn)移負(fù)荷和發(fā)病率顯著降低（圖5C-E）。在每只小鼠死于轉(zhuǎn)移性疾病的終末期，肺組織切片的轉(zhuǎn)移負(fù)荷量化顯示，注射shActA癌細(xì)胞的小鼠轉(zhuǎn)移減少的趨勢(shì)類似，但沒(méi)有達(dá)到顯著性（圖5F，G）。重要的是，與它們的轉(zhuǎn)移進(jìn)展減弱一致，注射ActA KD腫瘤細(xì)胞的小鼠的存活率顯著提高（圖5H）。此外，腫瘤切除前循環(huán)中的ActA水平與生存時(shí)間呈負(fù)相關(guān)（圖5I）。這些發(fā)現(xiàn)證實(shí)了腫瘤來(lái)源的ActA，作者已經(jīng)證明它可以誘導(dǎo)纖維化的轉(zhuǎn)移前生態(tài)位，在促進(jìn)肺轉(zhuǎn)移中具有重要的功能，從而降低生存率。

圖4 ActA的KD抑制肺轉(zhuǎn)移前生態(tài)位的ECM重塑

5. ActA在乳腺癌患者中的表達(dá)與肺轉(zhuǎn)移的發(fā)生率相關(guān) 

       為了評(píng)估ActA在人類乳腺癌轉(zhuǎn)移中的作用，作者使用cBioPortal分析了來(lái)自The Metastatic Breast Cancer Project（2020）的乳腺癌轉(zhuǎn)移發(fā)生率數(shù)據(jù)。重要的是，盡管INHBA基因表達(dá)水平在無(wú)轉(zhuǎn)移和有轉(zhuǎn)移的患者之間沒(méi)有顯著差異（圖6A），但患者的器官特異性分層顯示，原發(fā)腫瘤中INHBA的高表達(dá)與肺轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)（圖6B），但與其他常見(jiàn)的乳腺癌轉(zhuǎn)移部位，包括肝臟、骨骼、腦/中樞神經(jīng)系統(tǒng)或區(qū)域淋巴結(jié)無(wú)關(guān)（圖6C）。表明ActA在促進(jìn)人類患者轉(zhuǎn)移中也具有肺特異性作用。此外，對(duì)TGFβ信號(hào)通路其他主要組分在位點(diǎn)特異性轉(zhuǎn)移患者數(shù)據(jù)集中的表達(dá)分析顯示，只有INHBA基因表達(dá)的增加與肺轉(zhuǎn)移的發(fā)生率相關(guān)，而該通路的其他組分保持不變（圖6D）。該分析進(jìn)一步表明INHBA表達(dá)在肺轉(zhuǎn)移中的核心作用。值得注意的是，肺轉(zhuǎn)移患者中Follistatin （FST）基因也上調(diào)。FST是INHBA的拮抗劑配體，作為一種天然的反饋調(diào)節(jié)途徑，已知FST會(huì)響應(yīng)ActA上調(diào)而上調(diào)。為了進(jìn)一步研究INHBA表達(dá)水平對(duì)轉(zhuǎn)移和生存的重要性，作者分析了激素受體陰性和三陰性乳腺癌患者的數(shù)據(jù)集，并比較了原發(fā)乳腺腫瘤中INHBA高表達(dá)和低表達(dá)患者的無(wú)轉(zhuǎn)移生存時(shí)間。有趣的是，INHBA的高表達(dá)與無(wú)轉(zhuǎn)移生存期的顯著降低相關(guān)（圖6E），這表明ActA的上調(diào)有助于更快的進(jìn)展。對(duì)包含多種乳腺癌亞型的乳腺癌患者的額外數(shù)據(jù)集的總生存率分析證實(shí)，原發(fā)腫瘤中INHBA高表達(dá)的患者的總生存率明顯低于INHBA低表達(dá)的患者（圖6F）。但高INHBA水平的患者轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的時(shí)間顯著縮短（圖6G）。事實(shí)上，單因素Cox回歸分析表明，INHBA高表達(dá)可以預(yù)測(cè)無(wú)轉(zhuǎn)移生存（HR： 2.385；CI： 1.240-4.588）和總生存期（HR： 1.399；CI： 1.1017-1.925），進(jìn)一步證實(shí)ActA信號(hào)在乳腺癌轉(zhuǎn)移進(jìn)展中起重要作用（圖6H）。引人注目的是，使用各種臨床參數(shù)對(duì)無(wú)轉(zhuǎn)移生存進(jìn)行的多變量分析顯示，高INHBA表達(dá)是該數(shù)據(jù)集中乳腺癌患者無(wú)轉(zhuǎn)移生存的only獨(dú)立預(yù)測(cè)因子（圖6I）。

       綜上所述，作者的研究結(jié)果表明，ActA從原發(fā)性乳腺腫瘤中分泌，并在轉(zhuǎn)移前肺中系統(tǒng)性地誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞活化，導(dǎo)致促纖維化基因的表達(dá)升高和膠原沉積增強(qiáng)。這有助于形成一個(gè)適宜的肺轉(zhuǎn)移生態(tài)位，導(dǎo)致轉(zhuǎn)移負(fù)擔(dān)增加和預(yù)后不良，在轉(zhuǎn)移器官中預(yù)防腫瘤誘導(dǎo)的纖維化可能是抑制或預(yù)防乳腺癌患者轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的有效治療方法，并暗示ActA是抗轉(zhuǎn)移治療的潛在靶點(diǎn)。 

圖5 ActA KD抑制肺轉(zhuǎn)移，提高生存率

圖6 在乳腺癌患者中，ActA表達(dá)增加與肺轉(zhuǎn)移增加和生存率降低相關(guān)

實(shí)驗(yàn)方法

構(gòu)建細(xì)胞和動(dòng)物模型，成纖維細(xì)胞分離，原位注射實(shí)驗(yàn)，用CM和重組激活素A （rActA）檢測(cè)成纖維細(xì)胞，血漿蛋白質(zhì)組學(xué)分析，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），Western blot，流式細(xì)胞儀分析，實(shí)時(shí)定量PCR。

參考文獻(xiàn)

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