FAM171B通過穩(wěn)定波形蛋白并增強(qiáng)CCL2介導(dǎo)的TAM浸潤(rùn)促進(jìn)膀胱癌進(jìn)展
膀胱癌是世界范圍內(nèi)第二大常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅人類健康。膀胱尿路上皮癌（BLCA）是膀胱癌最常見的病理類型，占所有膀胱癌的90%。侵襲和轉(zhuǎn)移是膀胱癌患者預(yù)后不良的主要原因。雖然非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌很少發(fā)生轉(zhuǎn)移，但約有15-20%進(jìn)展為肌層浸潤(rùn)性膀胱癌。肌層浸潤(rùn)性膀胱癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)高，5年生存率明顯低于非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌。免疫療法帶來了有希望的生存獲益，然而肌層浸潤(rùn)性膀胱癌的治療仍然具有挑戰(zhàn)性，因其有較高的復(fù)發(fā)率。因此，深入了解膀胱癌進(jìn)展的分子機(jī)制對(duì)于開發(fā)新的治療方法至關(guān)重要。
上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）是驅(qū)動(dòng)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的主要機(jī)制，是膀胱癌患者死亡的主要原因。波形蛋白（VIM）是間充質(zhì)細(xì)胞的關(guān)鍵標(biāo)志物，在膀胱癌的生長(zhǎng)、侵襲和不良預(yù)后相關(guān)。膀胱癌細(xì)胞EMT過程中波形蛋白表達(dá)上調(diào)，提示靶向波形蛋白有望成為阻止膀胱癌轉(zhuǎn)移進(jìn)展的一種治療策略。腫瘤微環(huán)境（TME）由多種促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的基質(zhì)細(xì)胞組成。這些細(xì)胞中腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs）構(gòu)成了最豐富的免疫細(xì)胞群。TAMs是抗腫瘤免疫的主要障礙，是免疫治療失敗的關(guān)鍵因素。值得注意的是，趨化因子配體2（CCL2）在巨噬細(xì)胞募集中起關(guān)鍵作用，并參與癌細(xì)胞增殖、癌癥轉(zhuǎn)移和免疫抑制性TME的建立。了解CCL2在膀胱癌中持續(xù)表達(dá)的分子機(jī)制可以為開發(fā)有效的抗CCL2治療提供新的理論基礎(chǔ)。FAM171B是一種廣泛表達(dá)且進(jìn)化保守的蛋白。在人結(jié)直腸癌細(xì)胞中，F(xiàn)AM171B被鑒定為miR-483-3p的功能靶點(diǎn)，參與調(diào)控奧沙利鉑耐藥。然而FAM171B的結(jié)構(gòu)、功能和在癌癥中的具體作用的理解仍然有限。該研究發(fā)表在《Journal of Experimental & Clinical Cancer Research》，IF：12.658。
技術(shù)路線
主要研究結(jié)果
1. FAM171B表達(dá)與BLCA患者腫瘤進(jìn)展及M2 TAM浸潤(rùn)呈正相關(guān)
為了評(píng)估FAM171B在膀胱癌中的臨床意義，研究者利用TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)、GEO數(shù)據(jù)庫(kù)和研究者的臨床中心的數(shù)據(jù)進(jìn)行了全面的分析。首先，研究者分析了TCGA-BLCA隊(duì)列中19個(gè)腫瘤組織和匹配的癌旁組織的RNA測(cè)序數(shù)據(jù)。結(jié)果顯示，F(xiàn)AM171B在BLCA腫瘤組織中的表達(dá)水平高于配對(duì)的癌旁組織（圖1A）。隨后，研究者對(duì)包含70例BLCA患者臨床標(biāo)本的組織微陣列進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，以定量FAM171B蛋白表達(dá)。代表性圖像提供于圖1B中。根據(jù)從組織微陣列分析獲得的臨床信息和IHC染色結(jié)果，研究者確定了高FAM171B蛋白水平與晚期T分期和晚期N分期之間的顯著相關(guān)性（圖1C，D）。對(duì)TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中406例BLCA組織的RNA測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行的分析獲得了一致的結(jié)果（圖1J-L）。這些結(jié)果提示，F(xiàn)AM171B表達(dá)水平升高與較晚期的臨床病理分級(jí)和分期相關(guān)。此外，研究者的預(yù)后分析表明，F(xiàn)AM171B蛋白水平升高的BLCA患者顯示出顯著較低的總生存（OS）率、無進(jìn)展生存（PFS）率和疾病特異性生存（DSS）率（圖1E-G）。然而，無病生存(DFS)率的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖1H）。為了驗(yàn)證FAM171B在膀胱癌中的表達(dá)與生存率之間的關(guān)系，研究者使用了來自GEO數(shù)據(jù)庫(kù)的613例患者的完整隊(duì)列。結(jié)果表明，在該隊(duì)列中，F(xiàn)AM171B蛋白水平升高與較差的OS結(jié)局顯著相關(guān)（圖1I）。此外，對(duì)TCGA-BLCA隊(duì)列中的免疫細(xì)胞浸潤(rùn)進(jìn)行的分析表明，F(xiàn)AM171B表達(dá)與巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)的相關(guān)性最強(qiáng)（圖1M）。研究者進(jìn)一步研究了影響單核/巨噬細(xì)胞的趨化因子表達(dá)與FAM171B的關(guān)系。在評(píng)估的趨化因子中，只有CCL2與FAM171B具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著相關(guān)性（圖1N）。對(duì)于FAM171B與BLCA中巨噬細(xì)胞表型之間的關(guān)聯(lián)，基于QUANTISEQ算法的免疫分析顯示FAM171B表達(dá)與M2型巨噬細(xì)胞之間存在顯著的正相關(guān)（圖1P），而與M1型巨噬細(xì)胞之間沒有顯著的相關(guān)性（圖10）。在組織芯片中評(píng)估FAM171B與基質(zhì)細(xì)胞浸潤(rùn)的關(guān)系。代表性圖像如圖1Q所示。根據(jù)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果，將所有樣本分為FAM171B高表達(dá)組和低表達(dá)組。通過多次免疫熒光分析，研究者發(fā)現(xiàn)FAM171B蛋白的表達(dá)水平與CD206+ M2巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)顯著正相關(guān)，而與CD8+ T細(xì)胞的浸潤(rùn)呈負(fù)相關(guān)。然而，在α-SMA+成纖維細(xì)胞浸潤(rùn)方面，研究者沒有檢測(cè)到FAM171B高表達(dá)組和低表達(dá)組之間的顯著差異（圖1R）。綜上所述，研究者的研究結(jié)果表明，F(xiàn)AM171B與M2型巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)相關(guān)，并可能作為膀胱癌的潛在預(yù)后指標(biāo)。
圖1 FAM171B表達(dá)與BLCA患者腫瘤進(jìn)展及M2 TAM浸潤(rùn)呈正相關(guān)
2. FAM171B促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞的惡性表型
Chronos依賴性評(píng)分顯示，在CCLE數(shù)據(jù)庫(kù)中28個(gè)人膀胱尿路上皮癌細(xì)胞系中，T24細(xì)胞系的評(píng)分最低，表明FAM171B在T24細(xì)胞中比在其他細(xì)胞系中更關(guān)鍵（圖2A）。除T24人膀胱尿路上皮癌細(xì)胞外，研究者還納入了MB49小鼠膀胱尿路上皮癌細(xì)胞。為了研究FAM171B在膀胱癌細(xì)胞中的分子功能，研究者在T24和MB49細(xì)胞中敲低和過表達(dá)FAM171B，并通過Western blot分析驗(yàn)證其效率（圖2B）。CCK-8法檢測(cè)FAM171B對(duì)T24和MB49細(xì)胞活力的影響。兩個(gè)細(xì)胞系的結(jié)果表明，在96 h后，F(xiàn)AM171B過表達(dá)細(xì)胞的活力增加，而FAM171B敲低細(xì)胞的活力降低（圖2E）。此外，集落形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，過表達(dá)FAM171B后，T24和MB49細(xì)胞的集落形成能力顯著增加，而敲低FAM171B導(dǎo)致集落形成能力下降（圖2C，D）。這些體外研究結(jié)果表明，F(xiàn)AM171B基因的表達(dá)影響細(xì)胞增殖，盡管細(xì)胞活力的差異僅在96小時(shí)后才變得有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此外，研究者的目的是通過傷口愈合和transwell侵襲來闡明FAM171B對(duì)膀胱癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的影響。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與相應(yīng)的對(duì)照組相比，敲低FAM171B的T24和MB49細(xì)胞組中下室的遷移細(xì)胞數(shù)量減少，而過表達(dá)FAM171B時(shí)，下室的遷移細(xì)胞數(shù)量增加（圖2F，G）。同樣，敲低FAM171B降低了T24和MB49細(xì)胞的傷口愈合效果。而FAM171B過表達(dá)顯著加速了細(xì)胞遷移（圖2H，I）。這些體外結(jié)果強(qiáng)烈表明FAM171B促進(jìn)了膀胱癌細(xì)胞的惡性表型。
圖2 FAM171B促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞的惡性表型
3. RNA測(cè)序T24細(xì)胞以研究FAM171B的功能
為了研究FAM171B在膀胱癌細(xì)胞中的作用，研究者對(duì)FAM171B過表達(dá)和對(duì)照T24細(xì)胞進(jìn)行了RNA測(cè)序。樣本間相關(guān)性的熱圖表明，F(xiàn)AM171B過表達(dá)組和對(duì)照組之間的mRNA表達(dá)水平存在顯著差異，而各組內(nèi)的差異相對(duì)較小（圖3A）。通過對(duì)測(cè)序數(shù)據(jù)的分析，研究者確定了244個(gè)差異表達(dá)基因?；鹕綀D顯示了一些差異表達(dá)的基因；上調(diào)基因包括CDRT4、APLN和CCL2，下調(diào)基因包括RAB4B、CACNA1S和IL1A（圖3B）。此外，6個(gè)樣本的基因表達(dá)熱圖顯示，亞組間差異表達(dá)基因的表達(dá)存在顯著差異（圖3C）。為了進(jìn)一步了解FAM171B在T24細(xì)胞中的具體功能，研究者進(jìn)行了GO分析，KEGG分析和eggNOG分析。在T24細(xì)胞系中，GO分析顯示FAM171B與炎癥反應(yīng)和細(xì)胞因子介導(dǎo)的信號(hào)通路等生物學(xué)過程顯著相關(guān)（圖3D）。在細(xì)胞成分類別中，F(xiàn)AM171B與細(xì)胞外間隙和過時(shí)的細(xì)胞外區(qū)域部分顯著相關(guān)（圖3E）。在分子功能方面，F(xiàn)AM171B與腫瘤壞死因子激活受體活性和細(xì)胞因子活性顯著相關(guān)（圖3F）。KEGG分析表明，F(xiàn)AM171B主要與IL-17信號(hào)通路、細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用和TNF信號(hào)通路相關(guān)（圖3G）。此外，eggNOG功能分析顯示FAM171B主要參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制、復(fù)制、重組、修復(fù)和細(xì)胞骨架相關(guān)功能（圖3H）。綜上所述，RNA測(cè)序的結(jié)果全面揭示了FAM171B在人膀胱癌T24細(xì)胞系中的不同功能，表明其功能主要涉及細(xì)胞因子，信號(hào)通路轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞骨架相關(guān)過程。
圖3 RNA測(cè)序T24細(xì)胞以研究FAM171B的功能
4. 膀胱癌細(xì)胞中FAM171B與波形蛋白、HNRNPU相互作用
為了闡明FAM171B在蛋白質(zhì)水平上的分子作用，研究者通過免疫共沉淀和質(zhì)譜鑒定了膀胱癌細(xì)胞中FAM171B的主要相互作用蛋白。使用DYKDDDDK磁珠從過表達(dá)標(biāo)記FAM171B的T24細(xì)胞和對(duì)照細(xì)胞中收集含有FAM171B相互作用蛋白的上清液。隨后，利用質(zhì)譜鑒定出特定的正相互作用蛋白（圖4A，B）。質(zhì)譜鑒定出得分最高的相互作用蛋白如圖4C所示。利用STRING數(shù)據(jù)庫(kù)獲得FAM171B與其相互作用蛋白之間的相互作用。隨后構(gòu)建FAM171B的蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)，如圖4D所示。其中評(píng)分最高的VIM和HNRNPU被鑒定為T24細(xì)胞中與FAM171B相互作用的關(guān)鍵蛋白。人類FAM171B蛋白的預(yù)測(cè)結(jié)構(gòu)來自AlphaFold網(wǎng)站（圖4E）。為了進(jìn)一步探索蛋白質(zhì)之間的相互作用，研究者進(jìn)行了模擬，以可視化FAM171B與波形蛋白和HNRNPU的對(duì)接模式（圖4J，L）。免疫熒光結(jié)果顯示FAM171B蛋白在T24細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中均有表達(dá)（圖4F）。免疫熒光雙標(biāo)染色和共定位分析驗(yàn)證FAM171B與波形蛋白/HNRNPU的相互作用。雙重免疫熒光染色結(jié)果表明，F(xiàn)AM171B-波形蛋白復(fù)合體主要定位于細(xì)胞質(zhì)（圖4G），而FAM171B- HNRNPU復(fù)合體主要定位于細(xì)胞核（圖4H）。Image J軟件共定位分析證實(shí)FAM171B與波形蛋白和HNRNPU存在空間共表達(dá)（圖4J，K）。綜上所述，這些發(fā)現(xiàn)強(qiáng)調(diào)了波形蛋白和HNRNPU是膀胱癌細(xì)胞中FAM171B的主要相互作用蛋白。
圖4 膀胱癌細(xì)胞中FAM171B與波形蛋白、HNRNPU相互作用
5. FAM171B通過穩(wěn)定波形蛋白促進(jìn)膀胱癌的進(jìn)展
波形蛋白是EMT的蛋白標(biāo)記物，EMT是癌細(xì)胞獲得遷移和侵襲表型的過程。因此，研究者檢測(cè)了FAM171B對(duì)T24細(xì)胞EMT過程的影響。研究者觀察到FAM171B過表達(dá)的細(xì)胞中波形蛋白水平明顯升高，而FAM171B敲低的細(xì)胞中波形蛋白水平較對(duì)照組細(xì)胞降低。然而，在FAM171B過表達(dá)或敲低的T24細(xì)胞中，e-鈣黏蛋白和n-鈣黏蛋白的表達(dá)沒有顯著變化（圖5A）。此外，通過對(duì)組織芯片樣本的免疫組織化學(xué)染色分析，研究者發(fā)現(xiàn)FAM171B和波形蛋白的蛋白水平呈正相關(guān)（圖5K，L）。之前的結(jié)果表明FAM171B和波形蛋白在膀胱癌細(xì)胞中存在相互作用。蛋白質(zhì)印跡分析表明，過表達(dá)FAM171B后的波形蛋白水平增加，可以通過Vimentin-IN-1（一種誘導(dǎo)波形蛋白降解的波形蛋白抑制劑）處理逆轉(zhuǎn)（圖5B）。為了研究FAM171B是否通過vimentin增強(qiáng)膀胱癌細(xì)胞的侵襲和遷移，研究者用Vimentin-IN-1處理細(xì)胞，進(jìn)行劃痕實(shí)驗(yàn)和transwell侵襲實(shí)驗(yàn)。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Vimentin-IN-1部分抑制了FAM171B過表達(dá)引起的T24細(xì)胞侵襲能力的增加（圖5C，D）。同樣，劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Vimentin-IN-1處理降低了FAM171B過表達(dá)引起的T24細(xì)胞遷移率的增加（圖5E，F(xiàn)）。鬼筆環(huán)肽染色結(jié)果表明，高效過表達(dá)FAM171B導(dǎo)致膀胱癌細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生變化，從上皮形態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)殚g質(zhì)形態(tài)（圖5G）。接下來，研究者使用CHX抑制膀胱癌細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成，隨后通過蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)剩余的波形蛋白的水平。CHX處理10 h后，F(xiàn)AM171b過表達(dá)細(xì)胞的波形蛋白水平高于對(duì)照細(xì)胞（圖5H）。經(jīng)過分析，研究者觀察到過表達(dá)FAM171B使內(nèi)源性波形蛋白的半衰期從6 h延長(zhǎng)到9 h，表明FAM171B可以穩(wěn)定波形蛋白（圖5I）。隨后，研究者研究了FAM171B是否影響T24細(xì)胞中波形蛋白的泛素化。結(jié)果表明，F(xiàn)AM171B過表達(dá)導(dǎo)致波形蛋白泛素化水平降低，而FAM171B敲低導(dǎo)致泛素化水平升高（圖5J）。為了進(jìn)一步驗(yàn)證FAM171B/波形蛋白在體內(nèi)的作用，研究者使用T24細(xì)胞建立了小鼠皮下異種移植模型（圖5M）。小鼠異種移植瘤的IHC染色分析表明，在OE-FAM171B組中FAM171B的表達(dá)顯著增加，證實(shí)了模型的成功建立（圖5N，R）。此外，F(xiàn)AM171B上調(diào)了體內(nèi)波形蛋白的表達(dá)，這一作用被Vimentin-IN-1處理逆轉(zhuǎn)，與體外研究結(jié)果相似（圖5N，S）。而Vimentin-IN-1處理可有效緩解這一效應(yīng)（圖5O，P）。此外，在小鼠體重方面，Vimentin-IN-1處理可部分緩解FAM171B過表達(dá)導(dǎo)致的體重下降（圖5Q）。綜上所述，這些結(jié)果證實(shí)了FAM171B在體內(nèi)外通過穩(wěn)定波形蛋白促進(jìn)膀胱癌的進(jìn)展。
圖5 FAM171B通過穩(wěn)定波形蛋白促進(jìn)膀胱癌的進(jìn)展
6. FAM171B通過HNRNPU調(diào)控CCL2，促進(jìn)膀胱癌中TAM的遷移和浸潤(rùn)
研究者進(jìn)行體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)，研究FAM171B和HNRNPU對(duì)膀胱癌細(xì)胞CCL2表達(dá)的影響。ELISA結(jié)果顯示，在MB49小鼠膀胱癌細(xì)胞中，過表達(dá)FAM171B增加了CCL2的分泌，敲低FAM171B減少了CCL2的分泌（圖6A）。RIP實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了MB49細(xì)胞中HNRNPU與CCL2前體RNA的結(jié)合（圖6B）。與之前的研究結(jié)果一致，在MB49細(xì)胞中敲低HNRNPU可以增加CCL2前體RNA的水平并降低CCL2 RNA的水平（圖6C）。ELISA結(jié)果也證實(shí)，敲低HNRNPU降低了MB49細(xì)胞中CCL2的分泌（圖6D）。為了研究FAM171B和HNRNPU是通過共同途徑還是不同途徑影響CCL2分泌，研究者在FAM171B過表達(dá)的MB49細(xì)胞中分別進(jìn)行了HNRNPU敲低干預(yù)或CCR2抑制劑處理（圖6E）。ELISA結(jié)果顯示，敲低HNRNPU減弱了FAM171B過表達(dá)引起的CCL2分泌增加（圖6F）。CCL2是誘導(dǎo)單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞特異性趨化的眾所周知的趨化因子。為了探討FAM171B和HNRNPU對(duì)巨噬細(xì)胞趨化的影響，研究者將RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞與不同分組的MB49小鼠膀胱癌細(xì)胞共培養(yǎng)。趨化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在共培養(yǎng)系統(tǒng)中，F(xiàn)AM171B過表達(dá)增強(qiáng)了巨噬細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的趨化，而HNRNPU敲低和CCR2抑制部分減弱了這一作用（圖6G，H）。為了進(jìn)一步驗(yàn)證FAM171B/CCL2調(diào)控在體內(nèi)的作用，研究者使用MB49膀胱癌細(xì)胞建立了小鼠皮下移植瘤模型（圖6I）。免疫組化分析（圖6J，O）和流式細(xì)胞術(shù)（圖6K，P）結(jié)果證實(shí)，F(xiàn)AM171B過表達(dá)顯著增加了腫瘤組織中的巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，而CCR2抑制劑治療有效抑制了這一作用。重要的是，CCR2抑制劑還部分逆轉(zhuǎn)了FAM171B過表達(dá)引起的腫瘤生長(zhǎng)增加（圖6L，M），并減輕了體重減輕（圖6N）。綜上所述，這些實(shí)驗(yàn)表明FAM171B通過HNRNPU促進(jìn)CCL2分泌，從而導(dǎo)致巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)和腫瘤進(jìn)展。
圖6 FAM171B通過HNRNPU調(diào)控CCL2，促進(jìn)膀胱癌中TAM的遷移和浸潤(rùn)
7. FAM171B通過調(diào)控CCL2的表達(dá)增強(qiáng)TAM向M2表型的極化
研究者使用雙重免疫熒光染色和流式細(xì)胞術(shù)在體內(nèi)和體外研究FAM171B/CCL2調(diào)節(jié)對(duì)膀胱癌相關(guān)巨噬細(xì)胞極化的影響。流式細(xì)胞術(shù)分析顯示，與對(duì)照組相比，與過表達(dá)FAM171b的MB49細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，CD206陽(yáng)性的RAW264.7巨噬細(xì)胞比例增加。敲低HNRNPU和CCR2抑制劑的處理部分逆轉(zhuǎn)了FAM171B過表達(dá)誘導(dǎo)的CD206陽(yáng)性的增加（圖7A，B）。在IHC中，研究者使用了另一種M2巨噬細(xì)胞標(biāo)志物Arg1，并獲得了類似的結(jié)果（圖7C，D）。此外，研究者觀察到在共培養(yǎng)系統(tǒng)的培養(yǎng)基中，EGF和IL-10的分泌顯著增加，這兩種標(biāo)志物都是M2巨噬細(xì)胞的標(biāo)志物。有趣的是，THP-1來源的巨噬細(xì)胞與過表達(dá)FAM171b的T24細(xì)胞共培養(yǎng)后，其聚集性增強(qiáng)。為了進(jìn)一步驗(yàn)證FAM171B和CCL2在體內(nèi)的作用，研究者檢測(cè)了小鼠移植瘤中M2型巨噬細(xì)胞的比例。與體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，小鼠FAM171B過表達(dá)組皮下腫瘤中M2型巨噬細(xì)胞的比例增加，CCR2抑制劑處理顯著逆轉(zhuǎn)了FAM171B過表達(dá)的這一作用（圖7G-J）。綜上所述，這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了FAM171B具有通過CCL2通路促進(jìn)TME中TAM的M2極化的能力。
圖7 FAM171B通過調(diào)控CCL2的表達(dá)增強(qiáng)TAM向M2表型的極化
結(jié)論
研究者發(fā)現(xiàn)FAM171B是一個(gè)有效的促進(jìn)膀胱癌進(jìn)展的因子，并且與晚期癌癥分期和不良預(yù)后呈正相關(guān)。此外，F(xiàn)AM171B通過與波形蛋白相互作用，增強(qiáng)其穩(wěn)定性，發(fā)揮穩(wěn)定作用，導(dǎo)致腫瘤進(jìn)展。此外，F(xiàn)AM171B通過與HNRNPU相互作用增強(qiáng)CCL2 mRNA的剪接，最終導(dǎo)致TAM的募集并向M2表型極化?；谘芯空叩木C合研究結(jié)果，F(xiàn)AM171B作為膀胱癌診斷和治療干預(yù)的生物標(biāo)志物具有巨大的潛力。
機(jī)制圖
實(shí)驗(yàn)方法
TCGA和GEO數(shù)據(jù)的生物信息學(xué)分析，細(xì)胞培養(yǎng)，轉(zhuǎn)染，細(xì)胞增殖測(cè)定和集落形成測(cè)定，鬼筆環(huán)肽染色，RNA 免疫沉淀（RIP），qRT-PCR，蛋白質(zhì)印跡，免疫熒光染色（IF），免疫組織化學(xué)染色（IHC），HE染色，免疫共沉淀，流式細(xì)胞術(shù)，ELISA，傷口愈合試驗(yàn)，transwell侵襲試驗(yàn)，RNA測(cè)序、數(shù)據(jù)處理和基因差異分析，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，小鼠異種移植腫瘤模型
參考文獻(xiàn)
Hu WM, Li M, Ning JZ, Tang YQ, Song TB, Li LZ, Zou F, Cheng F, Yu WM. FAM171B stabilizes vimentin and enhances CCL2-mediated TAM infiltration to promote bladder cancer progression. J Exp Clin Cancer Res. 2023 Nov 2;42(1):290. doi: 10.1186/s13046-023-02860-5.