乙醇通過FoxO1調(diào)控肝細(xì)胞miR-148a依賴性TXNIP過表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞焦亡

酒精性肝病（ALD）是慢性肝病死亡的主要原因之一。但其發(fā)病機(jī)制尚未完全確定。2018年2月Heo MJ 在Gut（IF=17.01）上發(fā)表論文探討了ALD對肝細(xì)胞中miRNA的失調(diào)，以及肝損傷的影響。本研究通過檢測酒精肝炎（AH）患者、動物肝臟組織以及肝細(xì)胞中miR-148a的水平，證實了乙醇可通過激活miR-148a依賴性TXNIP過表達(dá)介導(dǎo)的NLPR3炎性小體的活化誘導(dǎo)肝細(xì)胞焦亡，為減少ALD的發(fā)生率和進(jìn)展提供了新的靶點信息。

技術(shù)路線：

結(jié)果：

1.miR-148a在AH和ALD動物模型中失調(diào)

Fig1

A.miRNA下調(diào)的聚類圖；B.PCR檢測 AH患者 miR-148a；C. PCR檢測小鼠肝臟miR-148a;D病理學(xué)檢測、以及血清中ALT和TG的含量變化；PCR檢測小鼠原代肝細(xì)胞和AML-12細(xì)胞中miR-148a的變化。

2.FoxO1為miR-148a的轉(zhuǎn)錄因子

Fig2

A.篩選目的基因；B，PCR檢測AH患者肝臟中FoxO1的表達(dá)量；C PCR檢測過量飲酒小鼠肝臟中FoxO1的表達(dá)量；D.WB檢測FoxO1，F(xiàn)oxO3a蛋白表達(dá)。

3. FoxO1誘導(dǎo)miR-148a的轉(zhuǎn)錄

Fig3

A. 在人體肝臟樣本中FoxO1與miR-148a的相關(guān)性；B.在小鼠肝臟樣本中FoxO1與miR-148a的相關(guān)性；C.轉(zhuǎn)染Mock或FoxO1的AML-12細(xì)胞中miR-148a表達(dá)增多；D.Chip驗證FoxO1與miR-148a啟動子區(qū)相結(jié)合；E. 熒光素酶報告基因檢測。

4.由乙醇引起miR-148a的失調(diào)可以導(dǎo)致TXNIP的過表達(dá)

Fig4

A. 確定miR-148a的靶基因；B.PCR檢測AH患者TXNIP含量；C.PCR,WB檢測小鼠肝臟中TXNIP的基因和蛋白表達(dá)含量；D檢測乙醇處理原代肝細(xì)胞中TXNIP的表達(dá)；E.轉(zhuǎn)染miR-480a mimic和miR-480a ASO后，檢測TXNIP的表達(dá)；F.雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?；G.miR-480a轉(zhuǎn)染乙醇處理的小鼠肝細(xì)胞，檢測TXNIP的基因和蛋白表達(dá)。

5.乙醇激活肝細(xì)胞NLRP3炎性小體

Fig5

A.NLRP3、Pycard、II1b聚類圖；B.乙醇處理后可增加原代肝細(xì)胞和AML-12細(xì)胞中NLRP3、Caspase-1、ASC的表達(dá)；D. TXNIP，NLRP3免疫熒光染色；E.免疫共沉淀和WB檢測Caspase-1、ASC、TXNIP蛋白表達(dá)；F. 轉(zhuǎn)染miR-480a激光共聚焦檢測TXNIP，NLRP3；G.流式檢測Caspase-1/PI雙陽性數(shù)量。

6.氯磷酸鹽處理小鼠肝細(xì)胞導(dǎo)致炎性因子激活

Fig6

A、B組織病理學(xué)染色；C.WB檢測相關(guān)蛋白；D.血清ALT和AST的活性；E.免疫組化染色檢測TXNIP和caspase-1。

7.肝細(xì)胞特異性傳遞miR-480a改善肝損傷

Fig7

A.組織病理學(xué)染色；B.WB檢測相關(guān)蛋白；C. 免疫組化染色檢測TXNIP和caspase-1；D.肝比重和血液生化指標(biāo)；E.乙醇誘導(dǎo)細(xì)胞焦亡的機(jī)制