外泌體與巨噬細(xì)胞

欄目：最新研究動(dòng)態(tài) 發(fā)布時(shí)間：2019-11-06
癌癥被認(rèn)為是包括腫瘤微環(huán)境（TME）的復(fù)雜系統(tǒng)。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAM）是TME中最常見的免疫相關(guān)基質(zhì)細(xì)胞......

導(dǎo)語：
  癌癥被認(rèn)為是包括腫瘤微環(huán)境（TME）的復(fù)雜系統(tǒng)。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAM）是TME中最常見的免疫相關(guān)基質(zhì)細(xì)胞，并且癌細(xì)胞和TAM之間的通信對上皮性卵巢癌（EOC）的進(jìn)展至關(guān)重要。源自EOC細(xì)胞的外泌體將巨噬細(xì)胞重塑為腫瘤促進(jìn)的表型，即TAMs。其中：若探明外泌體和相關(guān)的miRNA是如何介導(dǎo)這一系列反應(yīng)，那么上皮性卵巢癌治療或診斷生物標(biāo)志物的新型靶標(biāo)將拉開序幕。

一個(gè)大問題：
  來自缺氧上皮卵巢癌細(xì)胞的外泌體遞送微小RNA到巨噬細(xì)胞如何會引發(fā)腫瘤促進(jìn)細(xì)胞的表型變化？
技術(shù)路線：
1-上皮細(xì)胞癌細(xì)胞株培養(yǎng)和缺氧處理
2-外泌體的分離及電子顯微鏡檢驗(yàn)
3-miRNA模擬物/抑制物的轉(zhuǎn)染和HIF-1α and HIF-2α的siRNA
4-安捷倫miRNA微陣列基因芯片分析
5-熒光素酶報(bào)告基因測定
6-miRNA表達(dá)評估及Western blot 分析
7-免疫組織化學(xué)著色以及數(shù)據(jù)分析
研究結(jié)果：
1、缺氧外泌體促進(jìn)巨噬細(xì)胞極化。先分離純化SKOV3的外泌體，并用TEM鑒定。再將常氧和缺氧下SKOV3細(xì)胞分泌的外泌體分別處理無極化的巨噬細(xì)胞，與常氧外泌體相比，低氧外泌體促進(jìn)巨噬細(xì)胞極化。

2、低氧外泌體誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞促進(jìn)SKOV3細(xì)胞增殖和遷移收集了與常氧或缺氧下分泌的外泌體共同培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞的上清液在不同條件培養(yǎng)基中處理正常SKOV3細(xì)胞和HO-8910細(xì)胞5天，每天進(jìn)行CCK8檢測評估增殖情況。

3、利用基因芯片技術(shù)篩選出25個(gè)上調(diào)的miRNA和5個(gè)下調(diào)的miRNA，并驗(yàn)證了缺氧條件下誘導(dǎo)的外泌體比常氧條件下HIF-1α and HIF-2α誘導(dǎo)的外泌體中miR-21-3P、miR-125b-5p、miR-181d-5p表達(dá)水平更高。

4、miR-21-3P、miR-125b-5p、miR-181d-5p模擬物處理通過M2極化促進(jìn)SKOV3細(xì)胞增殖和遷移，用常氧或缺氧外泌體處理非極化的巨噬細(xì)胞，與常氧外泌體相比，三種miRNA與缺氧外泌體共培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞中表達(dá)更高。再通過免疫印跡、qRT-PCR、以及Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明成功轉(zhuǎn)染三種miRNA模擬物的巨噬細(xì)胞能夠促進(jìn)了上皮卵巢癌細(xì)胞的遷移。

5、通過轉(zhuǎn)染上調(diào)的miRNA到癌癥靶細(xì)胞，通過熒光素酶基因報(bào)告及免疫印跡等實(shí)驗(yàn)證實(shí)了相關(guān)下游基因的表達(dá)水平， 由此說明miR-21-3P、miR-125b-5p、miR-181d-5p調(diào)控SOCS4/5、STAT3信號通路從而影響巨噬細(xì)胞的M2表型極化。

6、通過表達(dá)SKOV3-lucl-pur細(xì)胞株并有效轉(zhuǎn)染miR-21-3P、miR-125b-5p、miR-181d-5p模擬物，用不同濃度和不同條件下的癌細(xì)胞模擬物及外泌體對4組裸鼠進(jìn)行腹腔注射。通過鼠內(nèi)巨噬細(xì)胞的標(biāo)記物CD163/CD206的表達(dá)水平測定以及裸鼠的解剖組織IHC等實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出缺氧條件下上皮細(xì)胞癌細(xì)胞分泌的外泌體通過三種miRNA誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的M2表型極化，從而促進(jìn)該EOC增殖和遷移。

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總結(jié)：
  文章數(shù)據(jù)結(jié)果說明缺氧條件增加了EOC分泌的外泌體中miR-21-3p，miR-125b-5p和miR-181d-5p的表達(dá)水平，它們被巨噬細(xì)胞內(nèi)吞，并通過HIF-1α and HIF-2α將非極化巨噬細(xì)胞促進(jìn)TAM表型。然后，TAM促進(jìn)EOC細(xì)胞增殖和遷移。同理可證，來源于缺氧EOC細(xì)胞的外泌體可能作為信使在癌細(xì)胞和巨噬細(xì)胞之間轉(zhuǎn)運(yùn)miR-21-3p，miR-125b-5p和miR-181d-5p。靶向外泌體或miRNA的生物功能可以為EOC的臨床治療提供新的思路及方法。