lncRNA與核糖體蛋白相互作用促腫瘤
癌癥是導(dǎo)致兒童死亡的最常見疾病，神經(jīng)母細(xì)胞瘤占比較大。關(guān)愛兒童健康中重要的一環(huán)就是對(duì)于致癌基因的研究。已發(fā)現(xiàn)lncRNA與癌癥聯(lián)系緊密，那么lncRNA和神經(jīng)母細(xì)胞瘤會(huì)產(chǎn)生哪些聯(lián)系呢？今天，小編帶大家一探其奧秘吧。
文章思路：
結(jié)果：
1. LncNB1在MYCN擴(kuò)增的神經(jīng)母細(xì)胞瘤中過表達(dá)
MYCN擴(kuò)增的神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系顯示出高N-Myc，MYCNOS和IGF2BP1表達(dá)水平以及低c-Myc RNA表達(dá)水平。染色體上的lncRNA RP1-40E16.9，也稱為LOC100507194和LINC02525，本文中稱為lncNB1，同樣高表達(dá)并顯示與N-Myc、 MYCNOS非常相似的表達(dá)模式，表明該lncRNA可能是參與MYCN擴(kuò)增的神經(jīng)母細(xì)胞瘤的腫瘤發(fā)生。檢查lncNB1在人腫瘤組織中的表達(dá)，lncNB1在人類神經(jīng)母細(xì)胞瘤中升高，在MYCN擴(kuò)增的膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中高表達(dá)，lncNB1 RNA表達(dá)與N-Myc mRNA表達(dá)正相關(guān)。
2. LncNB1上調(diào)DEPDC1B基因和E2F1蛋白表達(dá)
DEPDC1B可以誘導(dǎo)ERK蛋白的磷酸化，磷酸化的ERK是可以增強(qiáng)N-Myc蛋白的穩(wěn)定性。lncNB1 siRNA持續(xù)降低DEPDC1B mRNA和蛋白質(zhì)以及E2F1蛋白質(zhì)，但未顯示對(duì)E2F1 mRNA的一致作用。強(qiáng)力霉素治療減少lncNB1、DEPDC1B mRNA、DEPDC1B和E2F1蛋白、不減少E2F1 mRNA表達(dá)。
3. LncNB1通過DEPDC1B上調(diào)N-Myc蛋白表達(dá)
lncNB1 siRNA轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤細(xì)胞不會(huì)改變N-Myc mRNA的表達(dá), 但降低DEPDC1B蛋白的表達(dá)、ERK蛋白的磷酸化、N-Myc蛋白的S62磷酸化和表達(dá)。DEPDC1B siRNA的轉(zhuǎn)染效果一致。lncNB1 siRNA或DEPDC1B siRNA可使N-Myc蛋白半衰期減少約50％，加入蛋白酶抑制劑MG-132并沒有增加DEPDC1B蛋白的表達(dá)，上調(diào)N-Myc蛋白表達(dá)。敲低lncNB1減少了DEPDC1B和N-Myc蛋白表達(dá)，ERK蛋白磷酸化和NMyc蛋白在S62處磷酸化。
4.LncNB1通過E2F1激活DEPDC1B基因轉(zhuǎn)錄
克隆DEPDC1B基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游1146、545或75 bp區(qū)域到 pGL3 螢火蟲熒光素酶載體，并轉(zhuǎn)染該載體進(jìn)入強(qiáng)力霉素誘導(dǎo)的對(duì)照shRNA、lncNB1 shRNA-1或lncNB1 shRNA-2 BE（2）-C細(xì)胞。用強(qiáng)力霉素敲低lncNB1降低所有野生型的熒光素酶活性，表明DEPDC1B轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游75 bp區(qū)域?qū)τ趌ncNB1激活DEPDC1B基因轉(zhuǎn)錄至關(guān)重要。敲除75 bp區(qū)域的富含E2F1-結(jié)合位點(diǎn)的20 bp核苷酸廢除lncNB1 shRNAs的降低DEPDC1B啟動(dòng)子活性作用。E2F1敲低可降低DEPDC1B mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)。降低lncNB1表達(dá)減少了DEPDC1B基因核心的E2F1蛋白結(jié)合。過表達(dá)E2F1及其功能伴侶DP1增強(qiáng)野生型DEPDC1B基因啟動(dòng)子活性，DEPDC1B基因啟動(dòng)子的E2F1結(jié)合位點(diǎn)富集的20個(gè)核苷酸被刪除后，這種效應(yīng)也被廢除。
5.LncNB1通過結(jié)合RPL35來誘導(dǎo)E2F1蛋白翻譯
降低RPL35會(huì)下調(diào)DEPDC1B、N-Myc和E2F1蛋白表達(dá)，降低ERK蛋白磷酸化，降低N-Myc蛋白在S62處的磷酸化和表達(dá)?？筊PL35抗體有效降低了BE（2）-C和Kelly細(xì)胞中的RPL35蛋白，RPL35蛋白與lncNB1 RNA和E2F1 RNA結(jié)合，lncNB1 siRNA-1或siRNA-2轉(zhuǎn)染可降低RPL35蛋白質(zhì)與E2F1 RNA結(jié)合。lncNB1 siRNA減少了E2F1蛋白的合成，而不是全局蛋白的合成，RPL35 siRNA減少全局蛋白質(zhì)，包括E2F1的表達(dá)。lncNB1敲低轉(zhuǎn)移了E2F1 mRNA，減少E2F1 mRNA翻譯。綜合來看，lncNB1通過結(jié)合核糖體蛋白R(shí)PL35增加E2F1蛋白表達(dá)，導(dǎo)致E2F1蛋白質(zhì)合成和DEPDC1B基因轉(zhuǎn)錄。
6.LncNB1誘導(dǎo)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖和存活
敲低lncNB1降低了膠質(zhì)瘤活細(xì)胞的數(shù)量，減少增殖，誘導(dǎo)凋亡。DEPDC1B siRNA，RPL35 siRNA或E2F1 siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞減少瘤細(xì)胞數(shù)量。敲低lncNB1減少S期瘤細(xì)胞數(shù)量，誘導(dǎo)凋亡。
7.LncNB1敲低導(dǎo)致小鼠中神經(jīng)母細(xì)胞瘤消退
強(qiáng)力霉素誘導(dǎo)對(duì)照shRNA，lncNB1 shRNA-1或lncNB1 shRNA-2處理的瘤細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)強(qiáng)力霉素誘導(dǎo)廢除lncNB1 shRNA-1或lncNB1 shRNA-2處理的瘤細(xì)胞的克隆形成能力。強(qiáng)力霉素誘導(dǎo)的lncNB1 shRNA-1 BE（2）-C細(xì)胞異種移植到裸鼠中，當(dāng)腫瘤達(dá)到50mm3時(shí)強(qiáng)力霉素處理，發(fā)現(xiàn)強(qiáng)力霉素抑制神經(jīng)母細(xì)胞瘤進(jìn)展，敲降低lncNB1可以大大提高小鼠的整體生存率。
8.腫瘤組織中的高lncNB1預(yù)測患者預(yù)后不良
lncNB1 RNA表達(dá)與MYCN擴(kuò)增、N-Myc mRNA、DEPDC1B mRNA表達(dá)呈正相關(guān)，RPL35和E2F1 mRNA表達(dá)與DEPDC1B mRNA表達(dá)呈正相關(guān)。瘤組織中高表達(dá)lncNB1、DEPDC1B、RPL35和E2F1 RNA表達(dá)與患者不良預(yù)后相關(guān)。
