lncRNA與核糖體蛋白相互作用促腫瘤
癌癥是導致兒童死亡的最常見疾病，神經母細胞瘤占比較大。關愛兒童健康中重要的一環(huán)就是對于致癌基因的研究。已發(fā)現lncRNA與癌癥聯系緊密，那么lncRNA和神經母細胞瘤會產生哪些聯系呢？今天，小編帶大家一探其奧秘吧。
文章思路：
結果：
1. LncNB1在MYCN擴增的神經母細胞瘤中過表達
MYCN擴增的神經母細胞瘤細胞系顯示出高N-Myc，MYCNOS和IGF2BP1表達水平以及低c-Myc RNA表達水平。染色體上的lncRNA RP1-40E16.9，也稱為LOC100507194和LINC02525，本文中稱為lncNB1，同樣高表達并顯示與N-Myc、 MYCNOS非常相似的表達模式，表明該lncRNA可能是參與MYCN擴增的神經母細胞瘤的腫瘤發(fā)生。檢查lncNB1在人腫瘤組織中的表達，lncNB1在人類神經母細胞瘤中升高，在MYCN擴增的膠質瘤細胞系中高表達，lncNB1 RNA表達與N-Myc mRNA表達正相關。
2. LncNB1上調DEPDC1B基因和E2F1蛋白表達
DEPDC1B可以誘導ERK蛋白的磷酸化，磷酸化的ERK是可以增強N-Myc蛋白的穩(wěn)定性。lncNB1 siRNA持續(xù)降低DEPDC1B mRNA和蛋白質以及E2F1蛋白質，但未顯示對E2F1 mRNA的一致作用。強力霉素治療減少lncNB1、DEPDC1B mRNA、DEPDC1B和E2F1蛋白、不減少E2F1 mRNA表達。
3. LncNB1通過DEPDC1B上調N-Myc蛋白表達
lncNB1 siRNA轉染膠質瘤細胞不會改變N-Myc mRNA的表達, 但降低DEPDC1B蛋白的表達、ERK蛋白的磷酸化、N-Myc蛋白的S62磷酸化和表達。DEPDC1B siRNA的轉染效果一致。lncNB1 siRNA或DEPDC1B siRNA可使N-Myc蛋白半衰期減少約50％，加入蛋白酶抑制劑MG-132并沒有增加DEPDC1B蛋白的表達，上調N-Myc蛋白表達。敲低lncNB1減少了DEPDC1B和N-Myc蛋白表達，ERK蛋白磷酸化和NMyc蛋白在S62處磷酸化。
4.LncNB1通過E2F1激活DEPDC1B基因轉錄
克隆DEPDC1B基因轉錄起始位點上游1146、545或75 bp區(qū)域到 pGL3 螢火蟲熒光素酶載體，并轉染該載體進入強力霉素誘導的對照shRNA、lncNB1 shRNA-1或lncNB1 shRNA-2 BE（2）-C細胞。用強力霉素敲低lncNB1降低所有野生型的熒光素酶活性，表明DEPDC1B轉錄起始位點上游75 bp區(qū)域對于lncNB1激活DEPDC1B基因轉錄至關重要。敲除75 bp區(qū)域的富含E2F1-結合位點的20 bp核苷酸廢除lncNB1 shRNAs的降低DEPDC1B啟動子活性作用。E2F1敲低可降低DEPDC1B mRNA和蛋白質表達。降低lncNB1表達減少了DEPDC1B基因核心的E2F1蛋白結合。過表達E2F1及其功能伴侶DP1增強野生型DEPDC1B基因啟動子活性，DEPDC1B基因啟動子的E2F1結合位點富集的20個核苷酸被刪除后，這種效應也被廢除。
5.LncNB1通過結合RPL35來誘導E2F1蛋白翻譯
降低RPL35會下調DEPDC1B、N-Myc和E2F1蛋白表達，降低ERK蛋白磷酸化，降低N-Myc蛋白在S62處的磷酸化和表達?？筊PL35抗體有效降低了BE（2）-C和Kelly細胞中的RPL35蛋白，RPL35蛋白與lncNB1 RNA和E2F1 RNA結合，lncNB1 siRNA-1或siRNA-2轉染可降低RPL35蛋白質與E2F1 RNA結合。lncNB1 siRNA減少了E2F1蛋白的合成，而不是全局蛋白的合成，RPL35 siRNA減少全局蛋白質，包括E2F1的表達。lncNB1敲低轉移了E2F1 mRNA，減少E2F1 mRNA翻譯。綜合來看，lncNB1通過結合核糖體蛋白RPL35增加E2F1蛋白表達，導致E2F1蛋白質合成和DEPDC1B基因轉錄。
6.LncNB1誘導神經母細胞瘤細胞增殖和存活
敲低lncNB1降低了膠質瘤活細胞的數量，減少增殖，誘導凋亡。DEPDC1B siRNA，RPL35 siRNA或E2F1 siRNA轉染細胞減少瘤細胞數量。敲低lncNB1減少S期瘤細胞數量，誘導凋亡。
7.LncNB1敲低導致小鼠中神經母細胞瘤消退
強力霉素誘導對照shRNA，lncNB1 shRNA-1或lncNB1 shRNA-2處理的瘤細胞，發(fā)現強力霉素誘導廢除lncNB1 shRNA-1或lncNB1 shRNA-2處理的瘤細胞的克隆形成能力。強力霉素誘導的lncNB1 shRNA-1 BE（2）-C細胞異種移植到裸鼠中，當腫瘤達到50mm3時強力霉素處理，發(fā)現強力霉素抑制神經母細胞瘤進展，敲降低lncNB1可以大大提高小鼠的整體生存率。
8.腫瘤組織中的高lncNB1預測患者預后不良
lncNB1 RNA表達與MYCN擴增、N-Myc mRNA、DEPDC1B mRNA表達呈正相關，RPL35和E2F1 mRNA表達與DEPDC1B mRNA表達呈正相關。瘤組織中高表達lncNB1、DEPDC1B、RPL35和E2F1 RNA表達與患者不良預后相關。
