nature methods報(bào)道分析自噬的新標(biāo)志：p-ATG16L1-s278

   自噬是一種高度保守的經(jīng)溶酶體介導(dǎo)的對(duì)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)和細(xì)胞器進(jìn)行降解、維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的自身穩(wěn)定的過程。它在正常生理過程和許多疾病中都發(fā)揮著重要調(diào)節(jié)作用，也一直是研究的熱點(diǎn)之一。
   對(duì)自噬水平的檢測(cè)方法也很多，這里簡(jiǎn)要介紹一些。首先是電子顯微鏡對(duì)自噬體的觀察。在超微結(jié)構(gòu)水平上，自噬體是一種雙層膜結(jié)
構(gòu)，包裹著尚未消化的胞內(nèi)細(xì)胞器。在電子顯微鏡下觀察到雙層膜自噬體結(jié)構(gòu)是確認(rèn)自噬體結(jié)構(gòu)的金標(biāo)準(zhǔn)，其數(shù)量和大小也是自噬水平的標(biāo)志。其次是標(biāo)志物?LC3/Atg8和?p62/SQSTM1的檢測(cè)。最后是自噬流檢測(cè)。bafilomycin?A1等自噬相關(guān)工具藥物處理后檢測(cè)LC3B-I/II轉(zhuǎn)化水平。GFP-LC3B融合蛋白標(biāo)記；通過游離GFP蛋白或者熒光顯微鏡觀察GFP信號(hào)的點(diǎn)狀聚集評(píng)價(jià)自噬流水平。mRFP/mCherry-GFP-LC3B串聯(lián)熒光蛋白檢測(cè)自噬流水平。根據(jù)兩種熒光蛋白在自噬溶酶體中的不同耐受能力而反映自噬流水平。
  近期國際頂級(jí)生化研究方法雜志nature methods上發(fā)表一篇使用p-ATG16L1-s278檢測(cè)自噬水平的文章，小編在這推薦給大家。
 

  前人報(bào)道中指出ULK能調(diào)節(jié)ATG16L1第278位絲氨酸的磷酸化，作者為了進(jìn)一步研究該位點(diǎn)修飾的功能，開發(fā)了這點(diǎn)該修飾的特異性抗體。在證明該抗體的特異性后，作者指出：在多重刺激誘導(dǎo)的自噬下，p-ATG16L1-s278是一種保守的自噬激活指示。如圖一所示。免疫熒光分析結(jié)果也顯示了p-ATG16L1-s278在自噬激活后被募集至自噬體膜上。同時(shí)，p-ATG16L1-s278水平提供了一種獨(dú)立于后期自噬阻滯的可靠的自噬率測(cè)量，并直接反映了自噬囊泡的形成。

                                圖1在多重刺激誘導(dǎo)的自噬下，p-ATG16L1-s278是一種保守的自噬激活指示
   作者認(rèn)為：在一個(gè)定義明確的系統(tǒng)中，p-ATG16L1-s278水平變化與LC3B-II一致。然而，在缺乏溶酶體抑制劑的情況下p-ATG16L1-s278很有可能獲得了更可靠的結(jié)果。這種分析的可靠性很可能是在更具技術(shù)挑戰(zhàn)性的實(shí)驗(yàn)中獲得更大的收益，如極少的細(xì)胞數(shù)了或不適合藥物處理的情況。在內(nèi)源性水平檢測(cè)自噬的應(yīng)用中，p-ATG16L1-s278抗體在各種組織、不同實(shí)驗(yàn)中都能更方便有效的發(fā)揮效果。此外，對(duì)p-ATG16L1-s278的分析可能會(huì)開辟研究自噬的誘導(dǎo)和調(diào)控機(jī)制的新途徑。
   最后，作者強(qiáng)調(diào)：我們還沒有確定在特定條件下僅使用p-ATG16L1-s278分析自噬有沒有誤導(dǎo)的困難，但這很有可能存在。因此，結(jié)合多種自噬分析方法仍然是自噬研究關(guān)鍵。盡管如此， p-ATG16L1-s278對(duì)于自噬研究者來說，這是一個(gè)令人興奮的工具。