肝細胞外泌體miRNA與巨噬細胞
肝巨噬細胞可以被許多因素激活，巨噬細胞向促炎表型（M1）極化是非酒精性脂肪肝疾病（NAFLD）進展中的一個重要事件。外泌體可通過轉(zhuǎn)移各種生物成分介導(dǎo)細胞間的通訊，外泌體是否參與肝細胞與巨噬細胞之間的通訊，進而影響NAFLD疾病進展， Hepatology新發(fā)表的一篇文章告訴你答案。
思維路線：
結(jié)果：
1. 血清miR-192-5p與NAFLD病理特征相關(guān)
NAFL和NASH患者的血清miR-192-5p水平均高于對照組, 與ALT和AST水平呈正相關(guān)。
2. 血清miR-192-5p水平與肝巨噬細胞激活相關(guān)
HFHCD喂養(yǎng)大鼠，第4周出現(xiàn)肝脂肪變性，第8周患上脂肪性肝炎。血清miR-192-5p與疾病進展相關(guān)。檢查大鼠肝CD68 + CD86 + M1細胞，發(fā)現(xiàn)第8周CD68 + CD86 + M1的數(shù)量顯著增加，M1特異性細胞因子如iNOS、IL-6、TNF-α也增加。相反，M2型巨噬細胞的標志物Arg1表達水平降低。
3. 脂毒性肝損傷時肝細胞源性外泌體miR-192-5p增加
從NASH患者中分離出血清外泌體大小分布為50-200 nm，典型尺寸約為100 nm。表達成熟外泌體標記CD63和CD81，還表達肝細胞標記蛋白ASGPR1和CYP2E1。測量NASH患者血清中的外泌體數(shù)量，發(fā)現(xiàn)NASH患者和HFHCD喂養(yǎng)大鼠均向血清中釋放更多外泌體，PA處理的人肝癌細胞系還釋放出更多外泌體。表明在肝脂毒性損傷的情況下，肝細胞釋放出更多外泌體。NASH患者、HFHCD喂養(yǎng)大鼠、PA處理的HepG2細胞中分離出的外泌體含有更多的miR-192-5p。
4. 脂毒性肝細胞源性miR-192-5p誘導(dǎo)巨噬細胞的激活
THP-1巨噬細胞在6小時后可有效攝取肝細胞來源的外泌體，PA處理的HepG2細胞衍生的外泌體劑量依賴性增加THP-1巨噬細胞中的miR-192-5p水平，iNOS，IL-6、TNF-α的上調(diào)和CD11b + CD86 +細胞增加都顯示出M1巨噬細胞活化， M2巨噬細胞不受影響。
5. Rictor是THP-1巨噬細胞中miR-192-5p的直接靶標
序列比對表明miR-192-5p具有野生型Rictor的3’UTR結(jié)合位點，Rictor是炎癥和免疫反應(yīng)的重要調(diào)節(jié)劑。熒光素酶報道基因?qū)嶒烇@示，miR-192-5p的過表達抑制野生型Rictor的活性，miR-192-5p抑制劑增加野生型Rictor的熒光素酶活性，對突變型Rictor 無影響。miR-192-5p的過表達抑制Rictor蛋白的表達，miR-192-5p抑制增加Rictor的表達。miR-192-5p的過表達降低p-Akt水平，抑制miR-192-5p則增加p-Akt水平。PA處理HepG2細胞來源的外泌體也顯著降低THP-1細胞中Rictor蛋白的水平，可被miR-192-5p抑制劑逆轉(zhuǎn)。
6.外泌體miR-192-5p是PA介導(dǎo)的M1巨噬細胞激活的關(guān)鍵因素
miR-192-5p可增加M1巨噬細胞標記基因（iNOS、IL-6、TNF-α），但不影響M2巨噬細胞標記基因表達，CD11b + CD86 +細胞顯著增加，CD11b + CD206 +細胞沒有變化。表明在THP-1巨噬細胞中miR-192-5p的過表達顯著誘導(dǎo)M1極化。THP-1細胞中敲低Rictor也誘導(dǎo)M1巨噬細胞激活。NASH患者的血清外泌體誘導(dǎo)iNOS增加3倍，IL-6增加10倍，TNF-α增加2倍，這種增加可被miR-192-5p抑制劑阻斷。
7.miR-192-5p對RICTOR / AKT / FOXO1信號的影響
FoxO1和糖原合酶激酶3β（GSK3β）都是Rictor / Akt1信號通路重要的下游靶標。miR-192-5p的過表達降低p-FoxO1表達水平，但不影響p-GSK3β。敲除Rictor會降低p-FoxO1和p-GSK3β在THP-1細胞中的表達。miR-192-5p在抑制HepG2細胞中Rictor / Akt1 / FoxO1信號傳導(dǎo)方面具有與PA處理相似的作用。PA處理或miR-192-5p模擬物可降低Rictor、p-Akt和p-FoxO1的蛋白質(zhì)水平。
總結(jié)：
肝細胞源性外泌體miR-192-5p在炎癥性巨噬細胞激活中起關(guān)鍵作用，可以通過Rictor / Akt / FoxO1信號通路誘導(dǎo)巨噬細胞激活，調(diào)節(jié)NAFLD疾病進展。血清外泌體miR-192-5p代表NAFLD / NASH疾病潛在的非侵入性的生物標志物和治療靶標。