circRNA研究思路知多少
環(huán)狀RNA（circRNA）是一類非編碼RNA，可以參與各類生理和病理過程，包括腫瘤發(fā)生和癌癥進(jìn)展等，備受科學(xué)界的關(guān)注。對(duì)于circRNA的研究正在火熱進(jìn)行中，那么關(guān)于它的研究思路知多少呢？一篇發(fā)表在Molecular Cancer上面的文章帶我們了解熟悉這個(gè)明星分子。
研究思路：
結(jié)果：
1. 非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）細(xì)胞中成纖維細(xì)胞生長因子受體1（FGFR1）衍生的circRNA的鑒定
circFGFR1（hsa_circ_0084003）在NSCLC腫瘤組織的表達(dá)上調(diào)，circFGFR1高的NSCLC患者有較大的腫瘤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和細(xì)胞分化不良，circFGFR1高表達(dá)的患者預(yù)后明顯比低表達(dá)的差，circFGFR1表達(dá)是術(shù)后復(fù)發(fā)和總生存期的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。這些表明circFGFR1可能參與了非小細(xì)胞肺癌的進(jìn)展。
2. 體內(nèi)外CircFGFR1促進(jìn)NSCLC細(xì)胞增殖，遷移和侵襲
NCI-H358和NCI-H1299細(xì)胞過表達(dá)circFGFR1，促進(jìn)了增殖，遷移和侵襲。癌細(xì)胞皮下植入裸鼠，發(fā)現(xiàn)circFGFR1過表達(dá)顯著促進(jìn)腫瘤生長和肺轉(zhuǎn)移。
3.CircFGFR1充當(dāng)多種miRNA的海綿
使用RIP circFGFR1下拉實(shí)驗(yàn)，純化circFGFR1相關(guān)的RNA，發(fā)現(xiàn)circFGFR1和miR-381-3p的富集，表明miR-381-3p是NSCLC細(xì)胞中與circFGFR1相關(guān)聯(lián)的關(guān)鍵miRNA之一；RNA免疫沉淀結(jié)果顯示circFGFR1和miR-381-3p顯著富集；螢光素酶實(shí)驗(yàn)顯示miR-381-3p降低了野生型circFGFR1細(xì)胞熒光素酶活性；使用生物素化的miR-381-3p模擬物下拉分析發(fā)現(xiàn)circFGFR1顯著富集；FISH分析表明circFGFR1和miR-381-3p共定位在NSCLC細(xì)胞中；circFGFR1過表達(dá)或沉默不影響miR-381-3p表達(dá)，miR-381-3p上調(diào)或敲低后circFGFR1沒有顯著變化。這些表明circFGFR1和miR-381-3p可能不會(huì)降解彼此。以上所有實(shí)驗(yàn)表明NSCLC細(xì)胞中circFGFR1可能充當(dāng)miR-381-3p的海綿。
4. CircFGFR1海綿miR-381-3p上調(diào)CXCR4表達(dá)
StarBase v3.0，PITA和miRanda算法被用來預(yù)測(cè)miR-381-3p靶基因，幾種致癌基因UBE2C，F(xiàn)GF7，F(xiàn)GFR2，F(xiàn)GFR1，IGF2BP1，MET和CXCR4 3'UTR mRNA包含miR-381-3p的靶序列。pLG3熒光素酶報(bào)告基因顯示轉(zhuǎn)染了野生型（wt）3'UTR序列的細(xì)胞的熒光活性能被miR-381-3p模擬物抑制；CXCR4 mRNA和蛋白的水平在miR-381-3p過表達(dá)細(xì)胞中降低，CXCR4 mRNA和蛋白的水平在circFGFR1過表達(dá)后明顯增加；在NSCLC患者組織樣本中發(fā)現(xiàn)circFGFR1和CXCR4正相關(guān)。
5.敲除CXCR4可逆轉(zhuǎn)circFGFR1誘導(dǎo)的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的增殖，遷移和侵襲
CXCR4-基因敲除NCI-H358和NCI-H1299細(xì)胞過表達(dá)circFGFR1 惡性表型與對(duì)照細(xì)胞無明顯差異。
6.較高水平的circFGFR1表達(dá)與細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞排斥和抗PD-1 NSCLC治療相關(guān)
調(diào)查circFGFR1 / CXCR4軸和免疫逃逸之間的關(guān)系，NSCLC組織中CD8 + T數(shù)明顯低于鄰近的非腫瘤組織，NSCLC組織circFGFR1 /CXCR4表達(dá)和CD8 + T細(xì)胞之間存在負(fù)相關(guān)，miR-381-3p表達(dá)與CD8 + T顯示出正相關(guān)，這些提示circFGFR1可能通過海綿miR-381-3p上調(diào)CXCR4發(fā)揮其免疫抑制作用。進(jìn)評(píng)估circFGFR1表達(dá)對(duì)抗PD-1治療抵抗力的作用，分析PD-1抗體在接受LLC-circFGFR1細(xì)胞異種移植小鼠中的抗腫瘤作用，發(fā)現(xiàn)LLC-circFGFR1組腫瘤生長表現(xiàn)出明顯的對(duì)PD-1抗藥性表型，生存時(shí)間較短。
