環(huán)狀RNA(circRNA)是一類非編碼RNA,可以參與各類生理和病理過程,包括腫瘤發(fā)生和癌癥進(jìn)展等,備受科學(xué)界的關(guān)注。對(duì)于circRNA的研究正在火熱進(jìn)行中,那么關(guān)于它的研究思路知多少呢?一篇發(fā)表在Molecular Cancer上面的文章帶我們了解熟悉這個(gè)明星分子。
研究思路:
結(jié)果:
1. 非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)細(xì)胞中成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體1(FGFR1)衍生的circRNA的鑒定
circFGFR1(hsa_circ_0084003)在NSCLC腫瘤組織的表達(dá)上調(diào),circFGFR1高的NSCLC患者有較大的腫瘤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和細(xì)胞分化不良,circFGFR1高表達(dá)的患者預(yù)后明顯比低表達(dá)的差,circFGFR1表達(dá)是術(shù)后復(fù)發(fā)和總生存期的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。這些表明circFGFR1可能參與了非小細(xì)胞肺癌的進(jìn)展。
2. 體內(nèi)外CircFGFR1促進(jìn)NSCLC細(xì)胞增殖,遷移和侵襲
NCI-H358和NCI-H1299細(xì)胞過表達(dá)circFGFR1,促進(jìn)了增殖,遷移和侵襲。癌細(xì)胞皮下植入裸鼠,發(fā)現(xiàn)circFGFR1過表達(dá)顯著促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)和肺轉(zhuǎn)移。
3.CircFGFR1充當(dāng)多種miRNA的海綿
使用RIP circFGFR1下拉實(shí)驗(yàn),純化circFGFR1相關(guān)的RNA,發(fā)現(xiàn)circFGFR1和miR-381-3p的富集,表明miR-381-3p是NSCLC細(xì)胞中與circFGFR1相關(guān)聯(lián)的關(guān)鍵miRNA之一;RNA免疫沉淀結(jié)果顯示circFGFR1和miR-381-3p顯著富集;螢光素酶實(shí)驗(yàn)顯示miR-381-3p降低了野生型circFGFR1細(xì)胞熒光素酶活性;使用生物素化的miR-381-3p模擬物下拉分析發(fā)現(xiàn)circFGFR1顯著富集;FISH分析表明circFGFR1和miR-381-3p共定位在NSCLC細(xì)胞中;circFGFR1過表達(dá)或沉默不影響miR-381-3p表達(dá),miR-381-3p上調(diào)或敲低后circFGFR1沒有顯著變化。這些表明circFGFR1和miR-381-3p可能不會(huì)降解彼此。以上所有實(shí)驗(yàn)表明NSCLC細(xì)胞中circFGFR1可能充當(dāng)miR-381-3p的海綿。
4. CircFGFR1海綿miR-381-3p上調(diào)CXCR4表達(dá)
StarBase v3.0,PITA和miRanda算法被用來預(yù)測(cè)miR-381-3p靶基因,幾種致癌基因UBE2C,F(xiàn)GF7,F(xiàn)GFR2,F(xiàn)GFR1,IGF2BP1,MET和CXCR4 3'UTR mRNA包含miR-381-3p的靶序列。pLG3熒光素酶報(bào)告基因顯示轉(zhuǎn)染了野生型(wt)3'UTR序列的細(xì)胞的熒光活性能被miR-381-3p模擬物抑制;CXCR4 mRNA和蛋白的水平在miR-381-3p過表達(dá)細(xì)胞中降低,CXCR4 mRNA和蛋白的水平在circFGFR1過表達(dá)后明顯增加;在NSCLC患者組織樣本中發(fā)現(xiàn)circFGFR1和CXCR4正相關(guān)。
5.敲除CXCR4可逆轉(zhuǎn)circFGFR1誘導(dǎo)的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的增殖,遷移和侵襲
CXCR4-基因敲除NCI-H358和NCI-H1299細(xì)胞過表達(dá)circFGFR1 惡性表型與對(duì)照細(xì)胞無明顯差異。
6.較高水平的circFGFR1表達(dá)與細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞排斥和抗PD-1 NSCLC治療相關(guān)
調(diào)查circFGFR1 / CXCR4軸和免疫逃逸之間的關(guān)系,NSCLC組織中CD8 + T數(shù)明顯低于鄰近的非腫瘤組織,NSCLC組織circFGFR1 /CXCR4表達(dá)和CD8 + T細(xì)胞之間存在負(fù)相關(guān),miR-381-3p表達(dá)與CD8 + T顯示出正相關(guān),這些提示circFGFR1可能通過海綿miR-381-3p上調(diào)CXCR4發(fā)揮其免疫抑制作用。進(jìn)評(píng)估circFGFR1表達(dá)對(duì)抗PD-1治療抵抗力的作用,分析PD-1抗體在接受LLC-circFGFR1細(xì)胞異種移植小鼠中的抗腫瘤作用,發(fā)現(xiàn)LLC-circFGFR1組腫瘤生長(zhǎng)表現(xiàn)出明顯的對(duì)PD-1抗藥性表型,生存時(shí)間較短。