中和IL-8可以增強(qiáng)膠質(zhì)瘤ICB療效

       惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤預(yù)后很差，由于標(biāo)準(zhǔn)治療的選擇有限，仍然具有挑戰(zhàn)性。盡管免疫檢查點(diǎn)阻斷(ICB)療法在治療多種腫瘤方面取得了顯著的成功，但I(xiàn)CB療法治療惡性膠質(zhì)瘤的臨床益處仍然有限。因此探究聯(lián)合靶點(diǎn)是十分必要的，該文于2023年4月發(fā)表在《Cancer Cell》，IF=50.3。

技術(shù)路線

主要研究結(jié)果
1、膠質(zhì)瘤患者腫瘤浸潤T細(xì)胞的解剖分析
       作者測量了腫瘤中的T細(xì)胞駐留模式和轉(zhuǎn)錄組，膠質(zhì)瘤組織和外周血樣本上的表面標(biāo)記和轉(zhuǎn)錄組，樣本包括51名低級別膠質(zhì)瘤(LGG)患者和101名高級別膠質(zhì)瘤(HGG)患者(圖1A)。作者首先用H&E和免疫組織化學(xué)(IHC)對71例膠質(zhì)瘤患者的腫瘤組織進(jìn)行染色，包括HGG和LGG。值得注意的是，大多數(shù)T細(xì)胞位于微血管區(qū)的血管周圍 (圖1B)，解剖轉(zhuǎn)錄圖譜數(shù)據(jù)證實(shí)了這一點(diǎn)(圖1C)。為了弄清是哪種趨化因子受體引導(dǎo)T細(xì)胞浸潤到膠質(zhì)瘤中，作者利用CyTOF檢測了14名新診斷患者的外周血單個核細(xì)胞(PBMCs)和膠質(zhì)瘤組織樣本，其中包括5對PBMCs和組織樣本。作者的研究結(jié)果顯示，在所檢測的趨化因子受體中，包括CCR4、CCR5、CCR6、CXCR3和CX3CR1，與外周血相比，只有CCR5和CXCR3在腫瘤CD4+和CD8+ T細(xì)胞上的表達(dá)均顯著升高(圖1D)，這表明需要CCR5和CXCR3來引導(dǎo)T細(xì)胞向膠質(zhì)瘤遷移。

圖1. 膠質(zhì)瘤中T細(xì)胞的景觀定位和解剖分析

2、膠質(zhì)瘤中T細(xì)胞單細(xì)胞測序
       為了全面剖析腫瘤微環(huán)境(TME)中T細(xì)胞的異質(zhì)性，作者從5個新分離的腫瘤和配對的PBMC中分離T細(xì)胞，并通過scRNA-seq和單細(xì)胞T細(xì)胞受體(TCR)測序(scTCR-seq)對它們進(jìn)行了分析。經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制篩選，作者總共獲得了116,205個T細(xì)胞(65,990個來自PBMC, 50,215個來自腫瘤)。TCR全庫測序鑒定出67,665個具有配對a鏈和b鏈的T細(xì)胞。利用免疫表位數(shù)據(jù)庫和分析資源(IEDB)工具排除非腫瘤特異性TCR后，剩余的潛在腫瘤反應(yīng)性TCR克隆型定義為至少兩個T細(xì)胞共享的配對a鏈和b鏈。根據(jù)先前的報(bào)道，T細(xì)胞簇根據(jù)其居住地、TCR克隆性和特征基因進(jìn)行分類。在腫瘤和PBMC樣本中共鑒定出18個T細(xì)胞簇，包括7個CD4+ T細(xì)胞簇，10個CD8+ T細(xì)胞簇和1個gd T細(xì)胞簇，每個T細(xì)胞簇都具有獨(dú)特的特征基因(圖2A)。具體而言，CD4+ T細(xì)胞區(qū)室多樣化，有7個簇。幼稚亞群(C1_CD4_Naive)在血液中占主導(dǎo)地位(圖2B)。中樞記憶亞群(C2_CD4_Tcm)在血液中普遍存在，其特征是IL7R、TCF7、SELL和MYC基因的高表達(dá)(圖2B)?？寺U(kuò)增的細(xì)胞毒性亞群(C6_CD4_Cyto)細(xì)胞高度表達(dá)細(xì)胞毒性相關(guān)基因NKG7、GZMA和GZMK(圖2B-2D)。一個功能失調(diào)的亞群(C7_CD4_Dysfun)也被克隆擴(kuò)增，并以編碼抑制CTLA-4的基因高表達(dá)和最低水平的細(xì)胞毒性相關(guān)基因?yàn)闃?biāo)志(圖2C, 2D)。值得注意的是，一個產(chǎn)生IL-8的亞群(C8_CD4_IL8)只在腫瘤中富集，并以IL8、NINJ1、HLA-DRA和HAVCR2高表達(dá)為特征(圖2B)。另一個非克隆擴(kuò)增的T細(xì)胞亞群(C9_CD4_Tn-like)高度表達(dá)幼稚標(biāo)記基因和SOCS3(圖2B)，因此代表了先前報(bào)道的幼稚樣T細(xì)胞亞群表達(dá)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞亞群(C12_Treg)的foxp3被克隆擴(kuò)增，表明TCR依賴性激活或分化(圖2C、2D)。同樣，轉(zhuǎn)錄特征和TCR克隆擴(kuò)增的組合分析顯示CD8+ T細(xì)胞有10個主要集群(圖2A)，高度克隆擴(kuò)增的T細(xì)胞(TCR克隆大小大于10,TCS > 10)主要位于TME(圖2B-2D)。預(yù)衰竭CD8+ T細(xì)胞(C3_CD8_Pre-Ex, TCS > 10, 37.8%)表達(dá)效應(yīng)基因NKG7、GZMA、GZMH和GZMK以及表面標(biāo)記基因LAG3、KLRB1、TIGIT和PDCD1，與之前的鑒定一致，優(yōu)先位于腫瘤部位(圖2B)。值得注意的是，效應(yīng)/記憶CD8+ T細(xì)胞在pbmc中優(yōu)先富集(圖2B)。其余4個非克隆或低克隆擴(kuò)增的CD8+ T細(xì)胞簇包括幼稚T細(xì)胞簇(C14_CD8_Naive)、中樞記憶亞群(C16_CD8_Tcm)、產(chǎn)生IL-8亞群(C18_CD8_ IL-8)和MGP基因標(biāo)記的未知簇(C10_ CD8_MGP)。為了探索這6個高度克隆擴(kuò)增的CD8+ T細(xì)胞簇的發(fā)育狀態(tài)和個體發(fā)生關(guān)系，作者進(jìn)行了時間軌跡分析和TCR克隆型評估。作者發(fā)現(xiàn)，在CD8+ T細(xì)胞總數(shù)的背景下，這六種不同的集群形成了發(fā)育順序，效應(yīng)/記憶CD8+ T集群停留在假時間的早期，其次是效應(yīng)、預(yù)衰竭、應(yīng)激、增殖和衰竭集群(圖2E)。基于TCR克隆型共享度的克隆分析也獨(dú)立驗(yàn)證了這種發(fā)育轉(zhuǎn)變。引人注目的是，三種最常見的腫瘤富集CD8+ T細(xì)胞亞群，預(yù)衰竭，衰竭和效應(yīng)亞群，構(gòu)成了大多數(shù)克隆T細(xì)胞，并且廣泛地共享它們的克隆(圖2C)，表明它們可能是殺死膠質(zhì)瘤腫瘤細(xì)胞的主要局部參與者，并且仍然是膠質(zhì)瘤的主要免疫治療靶點(diǎn)。為了進(jìn)一步驗(yàn)證作者關(guān)于趨化因子受體CCR5和CXCR3選擇性標(biāo)記膠質(zhì)瘤浸潤T細(xì)胞的觀察結(jié)果(圖1D)，總的來說，作者的發(fā)現(xiàn)強(qiáng)調(diào)趨化因子受體CXCR3和CCR5是T細(xì)胞遷移到膠質(zhì)瘤并執(zhí)行腫瘤殺傷功能所必需的。

圖2. T細(xì)胞的單細(xì)胞聚集

3、一種獨(dú)特的產(chǎn)生IL-8的CD4+ T細(xì)胞群存在于膠質(zhì)瘤TME中，預(yù)示著不良的臨床結(jié)果
       作者上面的T細(xì)胞圖譜已經(jīng)鑒定出一種獨(dú)特的CD4+ T亞型，它被標(biāo)記為選擇性表達(dá)IL- 8，并且只在腫瘤中富集(圖3A)。進(jìn)一步關(guān)注CD4+ T細(xì)胞區(qū)室的轉(zhuǎn)錄組評估顯示，表達(dá)IL-8的CD4+ T細(xì)胞表現(xiàn)出先天樣特征，大量表達(dá)經(jīng)典巨噬細(xì)胞相關(guān)效應(yīng)基因，如IL8、IL1B、CCL3 (MIP-1a)、CCL4 (MIP-1b)和骨髓表面標(biāo)記基因NINJ1和CX3CR1(圖3B)。然后，作者通過免疫組化、免疫熒光(IF)染色和流式細(xì)胞術(shù)評估了IL-8、CX3CR1和NINJ1蛋白的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)IL-8蛋白在膠質(zhì)瘤微血管區(qū)周圍的一部分CD4+ T細(xì)胞中高表達(dá)，與一般T細(xì)胞分布模式一致，這些產(chǎn)生IL-8的CD4+ T細(xì)胞也高水平表達(dá)CXCR3和NINJ1(圖3C)。此外，作者對來自健康供體和膠質(zhì)瘤患者的75個血液和73個膠質(zhì)瘤樣本的T細(xì)胞進(jìn)行了流式細(xì)胞術(shù)分析，觀察到IL-8在腫瘤樣本中活化的CXCR5+ CD4+ T細(xì)胞中選擇性表達(dá)(圖3D)。盡管如此，血液中表達(dá)IL-8的T細(xì)胞優(yōu)先局限于CXCR5 CD4+ T細(xì)胞群(圖3D)，表明失活或初始CD4+ T細(xì)胞。接下來，作者研究了產(chǎn)生IL-8的T細(xì)胞簇的免疫特性與臨床結(jié)果的相關(guān)性。首先，作者描述了關(guān)鍵的特征基因表達(dá)水平，并將其指定為特征分?jǐn)?shù)。在兩種GBM中，產(chǎn)生IL-8的CD4+ T細(xì)胞的特征評分越高，總生存率越差(風(fēng)險(xiǎn)比[HR][95%可信區(qū)間(CI)] = 4.09 [2.68, 6.25];p < 0.0001)和LGG患者(HR [95% CI] = 2.98 [2.02, 4.39];p < 0.0001)(圖3E)。IL-8在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)與其受體CXCR1和CXCR2均呈正相關(guān)，可獨(dú)立預(yù)測膠質(zhì)瘤患者預(yù)后不良(圖3F)。總的來說，作者的研究證明了一種獨(dú)特的產(chǎn)生IL-8的CD4+ T細(xì)胞群，這與膠質(zhì)瘤患者的低生存率有關(guān)。

圖3. 產(chǎn)生IL -8的CD4+ T細(xì)胞亞群預(yù)示著不良的臨床預(yù)后

4、由腫瘤分泌刺激分化的產(chǎn)生IL-8的T細(xì)胞表現(xiàn)出先天樣的特征，具有促進(jìn)腫瘤生長和骨髓白細(xì)胞募集的能力
       膠質(zhì)瘤浸潤T細(xì)胞的偽時間軌跡分析顯示，IL-8的表達(dá)僅限于終末分化和非克隆CD4+ T細(xì)胞(圖2E)，這與IL-8在幼稚CD4+ T細(xì)胞(尤其是兒童或臍帶血)中的自發(fā)表達(dá)形成對比。作者假設(shè)膠質(zhì)瘤中產(chǎn)生IL-8的T細(xì)胞被腫瘤因子極化，并且獨(dú)立于TCR信號傳導(dǎo)。為了驗(yàn)證這一假設(shè)，作者從健康供體中分離出人類原始CD4+ T細(xì)胞，并用膠質(zhì)瘤培養(yǎng)上清液刺激它們。IL-8在T細(xì)胞中的表達(dá)以時間和劑量依賴的方式升高至 55%(圖4A)?；诖罅縍NA測序數(shù)據(jù)的分層聚類分析顯示，體外分化的產(chǎn)生IL-8的T細(xì)胞具有與體內(nèi)CD4_IL8集群相似的基因表達(dá)模式(圖4B)。具體來說，2064個基因的表達(dá)(增加1487個;down, 577)在體外極化產(chǎn)生IL-8的T細(xì)胞和C8_CD4_IL8簇中都發(fā)生了相同的變化(圖4B)。通過基因集富集分析(GSEA)和創(chuàng)新途徑分析(IPA)進(jìn)一步評估超過2倍改變的基因，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生IL-8的T細(xì)胞上調(diào)巨噬相關(guān)基因，包括IL-8、IL-1B、IL-6、CCL2、CCL3、CCL4、CCL20、CHI3L1、CX3CR1等，具有類似于膠質(zhì)瘤相關(guān)骨髓細(xì)胞的先天分子特征(圖4C和4D)，可能在功能上與血管生成、單核細(xì)胞/中性粒細(xì)胞趨化性、和氧化還原。這些結(jié)果共同強(qiáng)調(diào)了先天樣IL-8+ CD4+ T細(xì)胞作為一種獨(dú)特的CD4+ T效應(yīng)譜系。接下來，作者試圖確定產(chǎn)生IL-8的CD4+ T細(xì)胞在膠質(zhì)瘤中的功能。作者分別以1:1的比例將U373細(xì)胞接種到免疫缺陷小鼠的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，或與幼稚和體外生成的產(chǎn)生IL-8的CD4+ T細(xì)胞一起接種。接受IL-8+ CD4+ T細(xì)胞的小鼠與初代T細(xì)胞小鼠和對照組相比，腫瘤生長明顯(圖4E)。腫瘤浸潤免疫細(xì)胞的離體分析顯示，與其他兩組相比，IL-8+ CD4+ T接受組CD45+ CD11b+ Gr1+髓樣細(xì)胞顯著增加，供體IL-8+ CD4+ T細(xì)胞組成性高表達(dá)IL-8(圖4F和4G)。為了進(jìn)一步驗(yàn)證產(chǎn)生IL-8的T細(xì)胞功能，作者采用另一種膠質(zhì)瘤異種移植小鼠模型，將20,000個GBM5細(xì)胞(作者最近研究中描述的一種原發(fā)性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系)接種到免疫功能低下的小鼠腦內(nèi)(圖4H)。如圖4I所示，供體產(chǎn)生IL-8的T細(xì)胞與原位骨髓細(xì)胞緊密結(jié)合，與對照組相比吸引了更多的骨髓細(xì)胞。這些結(jié)果共同強(qiáng)調(diào)了IL-8+ CD4+ T細(xì)胞在腫瘤中的促腫瘤功能、對髓系白細(xì)胞的趨化性和促血管生成。鑒于上述觀察轉(zhuǎn)錄因子BHLHE41起到了足夠的作用在偏振引發(fā)+ CD4 + T細(xì)胞,作者下一個試圖評估其必要的角色在這些T細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)消融的BHLHE41 CRISPRCas9系統(tǒng)無法消除引發(fā)表達(dá)CD4 + T細(xì)胞,在人類和自適應(yīng)傳輸BHLHE41-knockout CD4 + T細(xì)胞沒有逆轉(zhuǎn)腫瘤的生長和鼠標(biāo)生存相比,對照組的爭奪(數(shù)據(jù)沒有顯示)。因此，這些結(jié)果表明BHLHE41在編程表達(dá)IL-8的CD4+ T細(xì)胞中發(fā)揮了充分而非必要的作用。

圖4. 產(chǎn)生IL -8的T細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄和功能鑒定

5、惡性膠質(zhì)瘤中主要由腫瘤細(xì)胞、髓細(xì)胞和T細(xì)胞表達(dá)的IL-8增強(qiáng)了血管免疫微環(huán)境的抑制特性
       越來越多的臨床證據(jù)表明，血漿中IL-8的表達(dá)水平與腫瘤負(fù)荷呈正相關(guān)，但與ICB治療的臨床結(jié)果呈負(fù)相關(guān)，這導(dǎo)致了針對IL-8和/或其受體CXCR1/CXCR2的潛在癌癥治療方向。然而，由于嚙齒動物缺乏IL-8基因，IL-8在體內(nèi)的功能，特別是作為腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵免疫調(diào)節(jié)因子，尚不清楚。作者首先研究了惡性膠質(zhì)瘤中IL-8產(chǎn)生的細(xì)胞來源。對人GBM的snRNA-seq數(shù)據(jù)分析顯示，IL8的表達(dá)主要局限于腫瘤細(xì)胞、髓細(xì)胞和T細(xì)胞(圖5A)。此外，作者遵循之前的策略，生成了IL-8人源化(IL8- hu)小鼠品系，其中將含有整個人類IL-8基因位點(diǎn)和上下游調(diào)控元件的~160 kb人類BAC克隆(RPL11-997L11)插入小鼠9號染色體的基因間區(qū)(圖5B)。與先前研究的觀察結(jié)果一致，在外觀、體重、壽命、生育能力和淋巴器官免疫細(xì)胞群方面，幼稚的IL8-Hu小鼠與WT對照小鼠沒有區(qū)別(數(shù)據(jù)未顯示)。然后，作者將表達(dá)熒光素酶的GL261細(xì)胞注射到小鼠顱內(nèi)，以模擬人類膠質(zhì)母細(xì)胞瘤。與WT組相比，移植GL261的IL8-Hu小鼠腫瘤大小明顯增大，壽命明顯縮短(圖5C)。通過IHC和H&E染色對IL8-Hu小鼠腫瘤組織進(jìn)行組織學(xué)檢查，發(fā)現(xiàn)腫瘤壞死區(qū)域和血管密度增加，且常伴有IL-8陽性多形核白細(xì)胞(PMN)浸潤，其模式與人GBM腫瘤組織非常相似(圖5D)。更重要的是，IL-8在IL-8- hu小鼠腫瘤中CD45+ CD3骨髓細(xì)胞和CD4+ T細(xì)胞中的表達(dá)顯著升高，這些小鼠IL-8+ CD4+ T細(xì)胞轉(zhuǎn)錄反映了人類表達(dá)IL-8的CD4+ T細(xì)胞(圖5E)。此外，與對照組相比，IL8-Hu小鼠的腫瘤浸潤性CD4+和CD8+ T細(xì)胞攜帶更多的衰竭標(biāo)志物PD-1和TIM-3(圖5F)。因此，與WT小鼠相比，作者新生成的IL8-Hu小鼠品系更適合模擬人類膠質(zhì)瘤，在膠質(zhì)瘤中，人IL-8的生理表達(dá)能夠再現(xiàn)腫瘤生長加速和血管生成，并增強(qiáng)骨髓源性抑制細(xì)胞在TME中的募集。

圖5. IL-8人源化小鼠品系能夠更好地模擬膠質(zhì)瘤患者的TME

6、阻斷IL-8-CXCR1/CXCR2軸與抗pd -1免疫治療協(xié)同作用
       作者研究了阻斷IL-8-CXCR1/ CXCR2軸是否能增強(qiáng)抗pd -1在惡性膠質(zhì)瘤中的作用。藥物抑制劑reixin抑制CXCR1和CXCR2，可顯著減緩IL8-Hu和WT小鼠的腫瘤生長，提高生存率(圖6A和6B)。流式細(xì)胞術(shù)評估顯示，修復(fù)素治療不僅消除了抗pd -1誘導(dǎo)的CD11bhiGr1hi MDSCs和CD11bhiGr1mid MDSCs的基礎(chǔ)水平，也消除了腫瘤中CD11bhiGr1hi MDSCs和CD11bhiGr1mid MDSCs的基礎(chǔ)水平，但在IL8-Hu小鼠和WT小鼠的脾臟中沒有(圖6C、6D)。重要的是，PD-1的阻斷與修復(fù)素一起，進(jìn)一步將Tim-3和PD-1在T細(xì)胞中的表達(dá)降低到最低水平，盡管浸潤腫瘤的T細(xì)胞總數(shù)沒有顯著變化(圖6E)。因此，作者的研究結(jié)果為以下觀點(diǎn)提供了證據(jù):通過靶向CXCR1和CXCR2隔離MDSCs可以利用抗pd -1治療膠質(zhì)瘤的療效。接下來，作者通過檢查IL-8的中和是否具有類似的效果來擴(kuò)展作者的研究。由于人原發(fā)性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞也高水平表達(dá)IL-8，作者通過將IL-8和熒光素酶雙表達(dá)的GL261細(xì)胞注射到IL8-Hu小鼠中，然后用PD-1和/或IL-8阻斷抗體對其進(jìn)行順序處理，嚴(yán)格模擬人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(圖6F)。接受抗IL-8抗體的小鼠腫瘤大小明顯減小，生存率明顯提高(圖6G和6H)。值得注意的是，與同型對照組相比，PD-1和IL-8的雙重阻斷顯著延長了中位生存期18天(圖6H)。鑒于作者之前的數(shù)據(jù)顯示抗pd -1抗體在IL8-Hu小鼠中增加了全身IL-8，并且IL-8能夠促進(jìn)腫瘤血管生成，作者通過CD31免疫組化染色對膠質(zhì)瘤腫瘤的微血管進(jìn)行了組織學(xué)評估。與對照小鼠相比，接受抗pd -1抗體治療的荷瘤小鼠IL-8 - hu微血管密度顯著升高，而抗IL-8治療后微血管密度大大降低(圖6I)?？傊?，作者的研究結(jié)果表明，IL-8的中和相當(dāng)于其受體CXCR1和CXCR2的阻斷，通過消除抑制性MDSCs來增強(qiáng)T細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫。

圖6. 阻斷IL-8-CXCR1/CXCR2軸可發(fā)揮抗PD-1的作用

7、阻斷IL-8重編程膠質(zhì)瘤腫瘤微環(huán)境
       髓系細(xì)胞，包括單核細(xì)胞來源的巨噬細(xì)胞(MDMs)、小膠質(zhì)細(xì)胞和MDSCs，構(gòu)成膠質(zhì)瘤TME的主要非腫瘤性細(xì)胞成分。41,42接下來，作者進(jìn)行了scRNA-seq分析，以探討在單獨(dú)阻斷PD-1和IL-8以及聯(lián)合阻斷的情況下膠質(zhì)瘤TME的變化。如圖7A-7C所示，對腫瘤中CD45+細(xì)胞的scRNA-seq數(shù)據(jù)進(jìn)行無監(jiān)督聚類分析，鑒定出10種細(xì)胞亞型，包括小膠質(zhì)細(xì)胞、T細(xì)胞、MDM、M-MDSC、G-MDSC、樹突狀細(xì)胞(DC)、活化DC、漿細(xì)胞樣DC (pDC)、肥大細(xì)胞和B細(xì)胞。與作者流式細(xì)胞術(shù)觀察的結(jié)果一致，與WT小鼠相比，更多的MDSCs浸潤到IL8-Hu的TME中，抗pd -1治療進(jìn)一步特異性增強(qiáng)了M-MDSCs的浸潤，而IL-8中和消除了腫瘤浸潤的M-MDSCs，無論是否存在抗pd -1抗體(圖7D和7E)。此外，研究發(fā)現(xiàn)M-MDSCs容易產(chǎn)生活性氧，例如脂肪酸氧化相關(guān)基因Alox12e、Alox15和Pla2g3的選擇性表達(dá)，以及超氧陰離子產(chǎn)生相關(guān)基因Prg3、Tafa4和Nox1(圖7F)，這突出了G-MDSCs和M-MDSCs在協(xié)調(diào)腫瘤免疫抑制微環(huán)境方面的不同作用(TIME)。此外，據(jù)報(bào)道，促進(jìn)TIME的腫瘤浸潤性肥大細(xì)胞幾乎被IL-8中和耗盡(圖7D)。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(tam)，包括MDMs和小膠質(zhì)細(xì)胞，在WT和IL8-Hu小鼠的膠質(zhì)瘤TME中都大量富集(圖7D)。為了進(jìn)一步探索IL-8中和對tam的潛在影響，作者將MDM集群重新劃分為四個亞集群，包括亞集群1(2型樣巨噬細(xì)胞，m2樣)、亞集群2(抗腫瘤)、亞集群3(抗血管生成)和亞集群4(圖7G和7H)。作者發(fā)現(xiàn)，接受非抗IL-8治療的小鼠的腫瘤浸潤性MDM細(xì)胞大部分(80%)由具有免疫抑制和血管生成相關(guān)基因的m2樣巨噬細(xì)胞組成(圖7H和7I)。相比之下，接受抗IL-8單藥或聯(lián)合治療的小鼠MDM細(xì)胞主要由亞群3、抗血管生成巨噬細(xì)胞組成(圖7H、7I)。因此，作者的研究結(jié)果表明，IL-8的中和通過將m2樣巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)換為抗血管生成巨噬細(xì)胞來重新編程膠質(zhì)瘤中的MDMs。同樣，膠質(zhì)瘤駐地小膠質(zhì)細(xì)胞被重新分為四種亞型，包括靜息小膠質(zhì)細(xì)胞、抑制性小膠質(zhì)細(xì)胞、IL-13+細(xì)胞和炎性小膠質(zhì)細(xì)胞(圖7J和7K)。最引人注目的是，IL-8抑制有效地消融了具有免疫抑制和血管生成相關(guān)基因的抑制性小膠質(zhì)細(xì)胞(圖7I)。綜上所述，作者的上述數(shù)據(jù)表明，IL-8阻斷可以通過消除MDSCs和肥大細(xì)胞以及tam的重新填充，將膠質(zhì)瘤TME從促腫瘤狀態(tài)重塑為抗腫瘤狀態(tài)，從而與ICB治療協(xié)同產(chǎn)生整體抗腫瘤免疫反應(yīng)。

圖7. 阻斷IL-8可重編程腫瘤免疫微環(huán)境

結(jié)論
       總之，作者定義了一個治療上可靶向的趨化軸，并且靶向IL-8/CXCR1/ CXCR2軸聯(lián)合ICB可能使膠質(zhì)瘤患者受益。

實(shí)驗(yàn)方法
細(xì)胞懸浮液的制備、scRNA-seq、血細(xì)胞計(jì)數(shù)、T細(xì)胞體外分化、流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色、免疫熒光(IF)和免疫組化染色、ChIP-qPCR、ELISA、RNA測序、血管形成實(shí)驗(yàn)
參考文獻(xiàn)
Liu H, Zhao Q, Tan L, Wu X, Huang R, Zuo Y, Chen L, Yang J, Zhang ZX, Ruan W, Wu J, He F, Fang Y, Mao F, Zhang P, Zhang X, Yin P, Yan Z, Xu W, Lu H, Li Q, Liang M, Jia Y, Chen C, Xu S, Shi Y, Ping YF, Duan GJ, Yao XH, Han Z, Pang T, Cui Y, Zhang X, Zhu B, Qi C, Wang Y, Lv SQ, Bian XW, Liu X. Neutralizing IL-8 potentiates immune checkpoint blockade efficacy for glioma. Cancer Cell. 2023 Apr 10;41(4):693-710.e8. doi: 10.1016/j.ccell.2023.03.004. Epub 2023 Mar 23. PMID: 36963400.