抑制小膠質(zhì)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞自噬導(dǎo)致先天免疫反應(yīng)加劇與腦損傷惡化！

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       創(chuàng)傷性腦損傷（TBI）后過度和長期的神經(jīng)炎癥會導(dǎo)致長期的組織損傷和不良的功能結(jié)果。然而，腦損傷后炎癥反應(yīng)加劇的機制仍然知之甚少。作者之前研究表明，小鼠腦外傷后神經(jīng)元的巨噬/自噬通量受到抑制，并導(dǎo)致神經(jīng)元細(xì)胞死亡。本研究中，作者證明自噬在活化的小膠質(zhì)細(xì)胞和浸潤性巨噬細(xì)胞中也受到抑制，這增強損傷誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥反應(yīng)。巨噬細(xì)胞/小膠質(zhì)細(xì)胞特異性敲除關(guān)鍵自噬基因Becn1導(dǎo)致TBI后神經(jīng)炎癥總體增加。特別是，作者觀察到先天免疫反應(yīng)的過度激活，包括I型干擾素和炎性體途徑。損傷后小膠質(zhì)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞自噬缺陷與負(fù)責(zé)激活細(xì)胞先天免疫反應(yīng)的危險/損傷相關(guān)分子模式（DAMP）的吞噬清除減少有關(guān)。作者的數(shù)據(jù)還證明精確自噬在靶向和降解先天免疫途徑成分（如NLRP3炎性體）中的作用。最后，抑制小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞自噬導(dǎo)致腦損傷后神經(jīng)變性增加和長期認(rèn)知結(jié)果惡化。相反，在野生型小鼠TBI后，用雷帕霉素治療增加自噬可以減少炎癥并改善結(jié)果?？傊?，作者表明，抑制小膠質(zhì)細(xì)胞和浸潤性巨噬細(xì)胞的自噬有助于腦損傷后過度的神經(jīng)炎癥，從長遠(yuǎn)來看可能會阻止炎癥的消退和組織再生。本文于2023年7月發(fā)表于《Autophagy》期刊IF：13.3；Q1。
技術(shù)路線

主要實驗結(jié)果

1.腦損傷后活化小膠質(zhì)細(xì)胞和浸潤單核細(xì)胞的自噬受到抑制

       作者之前證明，在小鼠中度控制性皮質(zhì)沖擊（CCI）腦損傷后，不同細(xì)胞類型的損傷皮質(zhì)內(nèi)自噬通量的抑制發(fā)生在不同的時間點，激活的AIF1/IBA1陽性免疫細(xì)胞在損傷后3天出現(xiàn)自噬體積累高峰。
       參與TBI神經(jīng)炎癥反應(yīng)的免疫細(xì)胞包括活化的常駐小膠質(zhì)細(xì)胞和浸潤的單核/巨噬細(xì)胞。為區(qū)分這些細(xì)胞，作者對小膠質(zhì)細(xì)胞和浸潤性髓細(xì)胞中表達(dá)Cx3cr1啟動子綠色熒光蛋白（GFP）的Cx3cr1-GFP小鼠進(jìn)行適度的CCI。作者使用免疫熒光（IF）對皮層切片進(jìn)行共染色，同時檢測抗ADGRE1/F4/80抗體和自噬受體蛋白SQSTM1/p62，前者在浸潤的單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞中的表達(dá)水平高于小膠質(zhì)細(xì)胞，后者在自噬清除受損的細(xì)胞中積累（圖1A-B）。與作者之前的數(shù)據(jù)一致，免疫細(xì)胞中SQSTM1的積累在損傷后3天達(dá)到峰值。在該時間點，所有定量的CX3CR1⁺細(xì)胞中有13%的SQSTM1陽性；然而，在所有定量的CX3CR1⁺ ADGRE1⁺細(xì)胞中，有65%的細(xì)胞SQSTM1陽性（圖1C-D）。因此，盡管損傷后SQSTM1積累在小膠質(zhì)細(xì)胞（ADGRE1^low CX3CR1⁺）和浸潤性單核細(xì)胞（ADGRE1^high CX3CR1⁺）中均發(fā)生，但在浸潤性細(xì)胞群中更為明顯。
       利用Ccr2-RFP報告小鼠，在巨噬細(xì)胞和募集到炎癥部位的單核細(xì)胞中特異性表達(dá)來自Ccr2啟動子的RFP，證實浸潤性單核細(xì)胞的自噬抑制。損傷后3天，作者觀察到CCR2⁺細(xì)胞中自噬標(biāo)志物L(fēng)C3和SQSTM1共定位90%，證實浸潤細(xì)胞內(nèi)自噬通量明顯受到抑制（圖1E-F）。
       作者使用流式細(xì)胞術(shù)作為補充技術(shù)來評估TBI后駐留小膠質(zhì)細(xì)胞（PTPRC/ CD45^int ITGAM/CD11B⁺）和浸潤髓細(xì)胞（PTPRC^high ITGAM⁺，主要是LY6C⁺單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞）的自噬動力學(xué)（圖1G）。為評估自噬水平，作者使用針對LC3和SQSTM1的抗體，以及在溶酶體抑制的活細(xì)胞中熒光標(biāo)記自噬體的Cyto-ID^?PH敏感自噬染料。所有標(biāo)記均顯示共定位，證實相同的細(xì)胞積累自噬體和SQSTM1，與自噬通量的抑制一致（圖1H-I）。作者觀察到損傷后LC3⁺、SQSTM1⁺、自噬dye⁺小膠質(zhì)細(xì)胞和浸潤性髓細(xì)胞數(shù)量增加，并在損傷后3天達(dá)到峰值（圖1J-L）。與作者的IF數(shù)據(jù)一致，與常駐小膠質(zhì)細(xì)胞相比，所有標(biāo)記物在浸潤單核細(xì)胞中積累的程度更高，表明這些細(xì)胞的自噬抑制程度更高。
       盡管大腦中激活的小膠質(zhì)細(xì)胞，特別是浸潤性髓系細(xì)胞的總數(shù)在初始峰值后下降，但大量剩余細(xì)胞顯示出持續(xù)抑制自身吞噬的跡象，這可以從自噬染料在損傷后28天的積累中看出（圖1L）。損傷后自噬dye⁺循環(huán)血液單核細(xì)胞百分比保持不變。這表明單核細(xì)胞內(nèi)的自噬損傷僅限于那些穿過受損的血液腦屏障并進(jìn)入腦實質(zhì)的單核細(xì)胞。

圖1腦外傷后活化的小膠質(zhì)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞自噬受到抑制

2.自噬的抑制與促炎標(biāo)志物的表達(dá)增加有關(guān)

       為確定自噬通量受到抑制的活化小膠質(zhì)細(xì)胞和浸潤單核/巨噬細(xì)胞的炎癥狀態(tài)，作者在TBI后1、3和7天對Cx3Cr1-GFP小鼠皮質(zhì)腦切片進(jìn)行抗SQSTM1抗體和幾種炎癥標(biāo)記物的IF共染色。與先前發(fā)表的數(shù)據(jù)一致，作者觀察到損傷皮質(zhì)CX3CR1⁺細(xì)胞中促炎癥標(biāo)志物NOS2/iNOS（一氧化氮合酶2，誘導(dǎo)型），NLRP3和CYBB/NOX2（細(xì)胞色素b-245，β多肽）的顯著積累，并在損傷后3天達(dá)到峰值（圖2A-D）。大多數(shù)促炎小膠質(zhì)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞也積累高水平的SQSTM1，表明這些細(xì)胞的自噬通量受到抑制。損傷后3天，69%的CX3CR1⁺ NOS2⁺細(xì)胞、90%的CX3CR1⁺ NLRP3⁺細(xì)胞和89%的CX3CR1⁺ CYBB⁺細(xì)胞SQSTM1陽性。這些發(fā)現(xiàn)表明在小膠質(zhì)細(xì)胞和浸潤的單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞中炎癥極化與自噬通量的抑制有關(guān)。
       作者使用流式細(xì)胞術(shù)量化自噬通量高低水平的小膠質(zhì)細(xì)胞和浸潤性髓細(xì)胞的炎癥。作者使用反映自噬體積累的Cyto-ID^?自噬染料，鑒定具有高/正常水平自噬通量（dye^-）的細(xì)胞，以及具有低水平自噬通量/抑制自噬通量（dye⁺）的細(xì)胞，然后在假手術(shù)和TBI小鼠中評估這些細(xì)胞群中促炎細(xì)胞因子的水平。從損傷后1天開始，與同一時間點的dye^-小膠質(zhì)細(xì)胞相比，dye⁺小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)更高水平的促炎細(xì)胞因子、TNF/TNF-α和IL1B/IL-1β（圖2E-G）。與dye^-小膠質(zhì)細(xì)胞相比，dye⁺小膠質(zhì)細(xì)胞中IL1B的高表達(dá)持續(xù)到損傷后28天，而與dye^-小膠質(zhì)細(xì)胞相比，dye⁺小膠質(zhì)細(xì)胞中TNF的高表達(dá)在急性時間點仍具有統(tǒng)計學(xué)意義，但在損傷后28天失去統(tǒng)計學(xué)意義（與28天的dye^-小膠質(zhì)細(xì)胞相比，p = 0.062）。在浸潤性髓系細(xì)胞中，作者也觀察到損傷后dye⁺細(xì)胞中TNF和IL1B水平升高（圖2H-J），然而，直到較晚的時間點（損傷后7天和28天），這一點才有統(tǒng)計學(xué)意義。這些發(fā)現(xiàn)證實，抑制小膠質(zhì)細(xì)胞和浸潤性髓細(xì)胞的自噬與促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生水平升高有關(guān)。

圖2 自噬的抑制與TBI后促炎標(biāo)志物的表達(dá)增加有關(guān)

3.抑制自噬會加劇體外炎癥反應(yīng)

       作者進(jìn)行體內(nèi)研究結(jié)果表明，損傷后小膠質(zhì)細(xì)胞和單核/巨噬細(xì)胞的自噬抑制與促炎表型有關(guān)。為確定自噬抑制是否可能導(dǎo)致神經(jīng)炎癥加劇，作者使用小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞（IMG細(xì)胞）和小鼠巨噬細(xì)胞（RAW 246.7細(xì)胞）進(jìn)行體外研究。作者用針對不同階段自噬的抑制劑處理細(xì)胞：巴菲霉素A₁（BafA）抑制溶酶體酸化和自噬體-溶酶體融合；3-MA抑制自噬體形成所必需的III類磷脂酰肌醇3-激酶活性；MRT68921抑制ULK1和自噬起始。通過NOS2和NLRP3蛋白水平升高和一氧化氮生成增加評估，使用自噬抑制劑處理的IMG和RAW細(xì)胞炎癥均增加（圖3A-F）。這在基線條件下是正確的，在用脂多糖（LPS）預(yù)處理激活的細(xì)胞中也是如此。LPS處理不影響自噬通量（圖3G）。事實上，所有三種自噬抑制劑都增加促炎標(biāo)志物的水平，這表明調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞和微膠質(zhì)細(xì)胞的自噬（而不僅僅是該途徑的一種特定成分）可以直接改變體外炎癥反應(yīng)。作者在原代小鼠骨髓來源的巨噬細(xì)胞中觀察到類似的結(jié)果（圖3H）。

圖3 抑制巨噬細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的自噬會加劇體外炎癥反應(yīng)

4.抑制小膠質(zhì)細(xì)胞和浸潤單核細(xì)胞的自噬會加劇腦損傷后的炎癥反應(yīng)

       從Lyz2（溶菌酶2）啟動子表達(dá)Cre重組酶的Lyz2/LysM-cre小鼠已被廣泛用于巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的基因功能解剖。然而，使用Lyz2-cre小鼠靶向小膠質(zhì)細(xì)胞中的基因尚不確定。作者使用ROSA26-lox-STOP-lox-tdTomato （ROSA-tdTomato）報告小鼠檢測Lyz2-cre在小膠質(zhì)細(xì)胞中的作用，這些小鼠僅在cre介導(dǎo)重組后才表達(dá)熒光蛋白tdTomato。流式細(xì)胞術(shù)數(shù)據(jù)顯示，從假手術(shù)和TBI Lyz2-cre/ROSA-tdTomato小鼠大腦中分離的小膠質(zhì)細(xì)胞（PTPRC^int ITGAM⁺）中約有一半表達(dá)tdTomato，表明Cre介導(dǎo)的重組。正如預(yù)期的那樣，在TBI小鼠中，超過80%的浸潤單核細(xì)胞（PTPRC^high ITGAM⁺）是tdTomato⁺（圖4A）。因此，Lyz2-cre在大約一半的小膠質(zhì)細(xì)胞和大多數(shù)浸潤性單核細(xì)胞中活躍，使其成為研究小膠質(zhì)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞在腦損傷后神經(jīng)炎癥中作用的有用驅(qū)動因素。
       所有歸一化基因計數(shù)的偏最小二乘判別分析（PLS-DA）顯示，四個實驗小鼠組（對照假手術(shù)、becn1 cKO假手術(shù)、對照TBI、becn1 cKO TBI）在前兩個主坐標(biāo)上聚類，分別占樣本總變異的75.2%（損傷效應(yīng)）和4.5%（基因型效應(yīng)）（圖4B）。歐幾里得距離和病房聚類分析證實組間差異，根據(jù)損傷和基因型將小鼠分為四組（圖4C）。根據(jù)聚類模式，作者觀察到對照假手術(shù)組和becn1 cKO假手術(shù)組之間有輕微的重疊；對照TBI組和becn1 cKO TBI組分離效果較好。這表明becn1 cKO小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的自噬抑制導(dǎo)致神經(jīng)炎癥相關(guān)的轉(zhuǎn)錄變化，并且這些變化在TBI后加劇。
       組間的兩兩比較證實基因型和損傷誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄差異（圖4D）。對照假手術(shù)組與becn1 cKO假手術(shù)組、對照TBI組與becn1 cKO TBI組的兩兩比較顯示，假手術(shù)組和TBI組之間存在顯著的基因型依賴差異（圖4D）。對becn1 cKO TBI小鼠與對照TBI小鼠之間差異表達(dá)基因的通路分析顯示，“先天免疫反應(yīng)”是最富集的通路（圖4E）。重要的是，“自噬調(diào)節(jié)”也被列為最重要的差異表達(dá)途徑之一。單個基因NanoString數(shù)據(jù)分析證實，與對照TBI組相比，becn1 cKO TBI中先天免疫相關(guān)基因表達(dá)上調(diào)，自噬調(diào)節(jié)基因下調(diào)（圖4F-G）。
       作者在RNA和蛋白質(zhì)水平上確認(rèn)NanoString數(shù)據(jù)。在TBI后3天，與對照組相比，Becn1 cKO TBI腦組織中LC3-II和SQSTM1蛋白的積累增加（圖4H-I）。作者的分析還證實，與對照TBI相比，becn1 cKO TBI中促炎癥基因如Cybb和Nfkb1上調(diào)，而抗炎癥基因如Tgfb和Il10并未持續(xù)改變（圖4J-K）。免疫熒光染色證實becn1 cKO小鼠損傷后自身吞噬被抑制，神經(jīng)炎癥增加。在損傷后3天，作者觀察到損傷皮質(zhì)AIF1陽性免疫細(xì)胞中SQSTM1和促炎標(biāo)志物NOS2的積累增加（圖4L）。

圖4 小膠質(zhì)細(xì)胞和單核細(xì)胞特異性自噬抑制加劇腦外傷后的炎癥反應(yīng)

6.抑制精確自噬會加劇腦損傷后的先天免疫反應(yīng)

       作者的NanoString通路分析表明，與對照小鼠相比，先天免疫反應(yīng)是becn1 cKO中過度TBI神經(jīng)炎癥的介質(zhì)。這包括炎癥體和I型IFN通路的惡化。作者使用qRT-PCR證實這兩種途徑的參與，結(jié)果顯示，與對照TBI小鼠相比，becn1 cKO TBI中I型IFN通路基因Sting1、Cgas和Ifnb1以及炎性體通路基因Nlrp3、Casp1和Il1b的mRNA水平升高（圖5A-B）。這些發(fā)現(xiàn)在蛋白水平上得到證實，在損傷后3天，作者觀察到與對照組小鼠相比，becn1 cKO中促炎CYBB、CGAS、STING1和NLRP3蛋白水平升高（圖5C-D）。流式細(xì)胞術(shù)分析進(jìn)一步證實炎癥小體的激活加劇，損傷后becn1 cKO的小膠質(zhì)細(xì)胞和浸潤單核細(xì)胞中的IL1B水平均高于對照小鼠（圖5E-H）。
       通過精確自噬，先天免疫途徑的成分可以直接靶向自噬降解。與一般的自噬受體（如SQSTM1）不同，精確自噬依賴于三結(jié)構(gòu)域蛋白（TRIM）家族的成員來靶向先天免疫的特異性細(xì)胞質(zhì)調(diào)節(jié)因子。MEFV/TRIM20已被證明可靶向炎性體成分，包括NLRP3、NLRP1和proCASP1 （caspase 1），用于自噬降解。MEFV還作為ULK1、BECN1和ATG16L1復(fù)合物組裝的平臺。這表明MEFV作為一種自噬受體，可遞送炎性小體成分進(jìn)行自噬降解。除NLRP3外，作者還觀察到與對照TBI小鼠相比，becn1 cKO TBI皮層中MEFV蛋白的積累增加（圖5I-J）。Mefv mRNA水平保持不變（圖5K）。這與在SQSTM1中觀察到的情況相似（圖4H-J），表明在蛋白質(zhì)降解水平上進(jìn)行調(diào)控。免疫沉淀分析表明，與假手術(shù)皮層相比，損傷皮層中含有ULK1、MEFV和NLRP3的蛋白復(fù)合物的積累增加（圖5L），這支持精密自噬抑制是加劇神經(jīng)炎癥的一種機制。

圖5 抑制小膠質(zhì)細(xì)胞/單核細(xì)胞的精確自噬有助于加劇TBI后的先天免疫反應(yīng)

6、抑制小膠質(zhì)細(xì)胞和浸潤性單核細(xì)胞的自噬導(dǎo)致吞噬缺陷和DAMPs的積累
       受損細(xì)胞釋放DAMPs，DAMPs作為內(nèi)源性危險信號，誘導(dǎo)死亡細(xì)胞和細(xì)胞碎片（胞葬作用）吞噬，并在非感染性炎癥期間激活先天免疫反應(yīng)。通過免疫印跡（WB），作者觀察到與對照組相比，becn1 cKO小鼠在TBI后的SPTAN1/α-FODRIN和PRDX6的裂解水平更高，這表明可能存在去除DAMP的缺陷（圖6A，B）。這可能不是由貨物識別缺陷引起的，因為作者的NanoString數(shù)據(jù)表明，與對照TBI小鼠相比，becn1 cKO TBI中清除劑受體的表達(dá)增加而不是減少（圖6C）。
       除典型自噬外，BECN1也是LC3相關(guān)吞噬（LAP）的非典型自噬途徑所必需的，LAP利用自噬途徑的成分來介導(dǎo)DAMPs的胞葬作用和吞噬作用。利用流式細(xì)胞術(shù)，作者檢測becn1 cKO和對照小鼠腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞和浸潤單核細(xì)胞吞噬熒光乳膠珠的能力。作者觀察到，與對照組小鼠相比，損傷后becn1 cKO小膠質(zhì)細(xì)胞的吞噬活性顯著降低（圖6D-F）。
       除自噬機制的組成部分外，LAP還需要NADPH氧化酶-2（CYBB/NOX2）復(fù)合物在LC3相關(guān)吞噬體上的募集和活性。為確定LAP是否可能參與損傷后的DAMP清除，作者對表達(dá)GFP-LC3自噬報告基因的假手術(shù)和第3天TBI轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行IF染色切片。作者觀察到損傷后激活的小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞中GFP-LC3和CYBB的積累，證實LAP的潛在參與（圖6G-H）。在高倍鏡下，一些GFP-LC3細(xì)胞內(nèi)小點CYBB陽性，這表明它們是LAP吞噬體而不是自噬體（圖6I）。這些數(shù)據(jù)表明，與整體自噬類似，LAP在損傷后激活的小膠質(zhì)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中可能被抑制，導(dǎo)致DAMP去除障礙和神經(jīng)炎癥增加。

圖6 抑制小膠質(zhì)細(xì)胞/單核細(xì)胞的精確自噬導(dǎo)致TBI后吞噬缺陷和DAMPs積累

7、抑制小膠質(zhì)細(xì)胞和浸潤性單核細(xì)胞的自噬惡化損傷后的功能恢復(fù)
       作者評估抑制小膠質(zhì)細(xì)胞和單核細(xì)胞的自噬是否會影響損傷小鼠的運動和記憶功能。在腦損傷后21 ~ 25天采用Morris水迷宮（MWM）測試空間學(xué)習(xí)記憶能力。在探索試驗期間，becn1 cKO TBI小鼠在逃避象限的時間明顯少于對照TBI組，表明空間學(xué)習(xí)缺陷加?。▓D7A）。作者還觀察到在探索試驗期間使用的搜索策略的顯著差異。becn1 cKO 假手術(shù)組小鼠和對照假手術(shù)組小鼠均使用空間或順序搜索策略。雖然兩個TBI組越來越多地依賴于循環(huán)策略來定位平臺，但與對照TBI（50%）小鼠相比，becn1 cKO TBI（68.5%）更為明顯（圖7B-C）。
       為評估非空間陳述性記憶，作者在損傷后15-17天進(jìn)行新物體識別測試。在測試階段，與相應(yīng)的假手術(shù)組相比，TBI小鼠在新物體上花費的時間更少，證實預(yù)期的損傷效果。然而，與對照TBI小鼠相比，becn1 cKO TBI小鼠在新物體上花費的時間明顯減少（圖7D），這表明抑制小膠質(zhì)細(xì)胞和單核/巨噬細(xì)胞的自噬加劇損傷后的陳述性記憶障礙。
       為測試小膠質(zhì)細(xì)胞和浸潤單核細(xì)胞自噬抑制對TBI后整體組織損傷和神經(jīng)變性的影響，作者比較becn1 cKO TBI小鼠和對照組TBI小鼠在損傷后28天的海馬損傷體積和神經(jīng)元細(xì)胞計數(shù)。然而，與對照TBI小鼠相比，becn1 cKO TBI小鼠同側(cè)海馬鋸齒回（DG）中的神經(jīng)元細(xì)胞計數(shù)顯著減少，表明神經(jīng)元損失增加（圖7E-F）?？傊?，這些數(shù)據(jù)表明，通過小膠質(zhì)細(xì)胞和浸潤單核細(xì)胞的自噬抑制介導(dǎo)的炎癥增加加劇TBI誘導(dǎo)的神經(jīng)變性。qRT-PCR數(shù)據(jù)還顯示，在損傷后第28天，becn1 cKO TBI小鼠的整體先天免疫基因表達(dá)仍高于對照組TBI小鼠，但個體差異未達(dá)到顯著性（圖7G）。

圖7 小膠質(zhì)細(xì)胞/單核細(xì)胞的自噬抑制惡化，而自噬刺激可改善腦損傷后的長期認(rèn)知結(jié)果

8、增加自噬可減少神經(jīng)炎癥并改善腦損傷后的功能結(jié)果
       數(shù)據(jù)表明，自噬的抑制導(dǎo)致腦損傷后神經(jīng)炎癥延長和功能恢復(fù)不良。為確定增加自噬是否可以用于治療減少神經(jīng)炎癥和改善功能結(jié)果，作者用MTOR抑制劑和已知的自噬誘導(dǎo)劑雷帕霉素治療野生型小鼠。在接受雷帕霉素治療后，TBI小鼠在MWM和Y型迷宮任務(wù)中的表現(xiàn)，與藥物治療的TBI小鼠相比，顯示出記憶力的改善（圖7H）。損傷后3天的qRT-PCR分析顯示，先天免疫和炎癥相關(guān)基因的表達(dá)總體下降，但個體基因數(shù)據(jù)沒有達(dá)到顯著性（圖7I）。另一方面，雷帕霉素治療導(dǎo)致NLRP3、CGAS和STING1蛋白水平顯著降低（圖7J-K）。這與增加的自噬通過蛋白質(zhì)降解來控制先天免疫介質(zhì)水平的能力是一致的?？傊?，這些數(shù)據(jù)為TBI后自噬增加的抗炎作用提供進(jìn)一步的證據(jù)。
結(jié)論
       總之，本研究表明抑制小膠質(zhì)細(xì)胞和浸潤性巨噬細(xì)胞的自噬有助于腦損傷后過度的神經(jīng)炎癥，從長遠(yuǎn)來看可能會阻止炎癥的消退和組織再生。因此，再激活或增加自噬是一種有希望的干預(yù)途徑，可以解決多種細(xì)胞類型的多種腦損傷病理，強調(diào)需要更好地了解其機制和功能。

實驗方法
控制性皮質(zhì)沖擊（CCI）；細(xì)胞系；BMDM隔離和培養(yǎng)；體外藥物治療；雷帕霉素治療；Western blot；總一氧化氮檢測試劑盒；免疫組織化學(xué)；流式細(xì)胞術(shù)；qRT-PCR；NanoString 分析；免疫沉淀；神經(jīng)行為測試；組織學(xué)。
參考文獻(xiàn)
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